Efeito do tratamento com o complexo paladaciclo dppe 12 associado à cisteína proteinase recombinante rldccys1 sobre a infecção por leishmania (leishmania) amazonensis em modelo murino

• Autor(a) principal: Silva, Danielle Aparecida Marino da [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3604174; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/48129
• topic: Leishmania (L.) amazonensis; Amastigotas; Cisteína proteinase; rLdccys1; DPPE 1.2

O presente estudo teve como enfoque avaliar a ação leishmanicida do complexo paladaciclo DPPE 1.2 associado à rLdccys1 em camundongos BALB/c infectados com a L. (L.) amazonensis. A clonagem do gene Ldccys1, codificador da cisteína proteinase 1 de L. (L.) infantum chagasi, em vetor de expressão bacteriano originou a proteína recombinante rLdccys1, demonstrando-se por Western blot a antigenicidade cruzada da rLdccys1 com uma cisteína proteinase de 30 kDa expressa em amastigotas da L. (L.) amazonensis. O tratamento dos camundongos infectados totalizando 6,4 mg/Kg/animal do DPPE 1.2 associado a 7,5 mg/Kg/animal da rLdccys1 resultou em redução significante do tamanho das lesões comparado ao dos controles e em carga parasitária 25 vezes menor nos animais tratados com o DPPE 1.2 sozinho ou associado à rLdccys1. Não foi observado aumento das populações de linfócitos T CD4+ e T CD8+ nos linfonodos poplíteos e inguinais de nenhum dos grupos tratados. Quando a concentração do DPPE 1.2 foi dobrada (totalizando13,4 mg/Kg/animal), a carga parasitária foi 185 e 140 vezes menor nos animais tratados com o DPPE 1.2 e o DPPE 1.2 associado à rLdccys1, respectivamente, enquanto que nos tratados somente com a rLdccys1 essa redução foi de 4 vezes comparada à dos controles. Entretanto, nos dois experimentos o grau de redução da carga parasitária não foi significantemente diferente entre os animais tratados apenas com o DPPE 1.2 ou com o DPPE 1.2 associado à rLdccys1. A dosagem do TGF-? ativo nas lesões dos camundongos mostrou a redução significante da concentração dessa citocina em todos os grupos tratados comparada à dos controles. O tratamento com menor concentração do DPPE 1.2 (totalizando 2,5 mg/Kg/animal) resultou em grau de infecção significantemente diferente entre os camundongos tratados com o DPPE 1.2 sozinho ou associado à rLdccys1, sendo de 35 e 260 vezes, respectivamente, a redução da carga parasitária nesses animais e de 6 vezes nos tratados somente com a rLdccys1 comparada à dos controles. Nesses animais a atividade leishmanicida foi acompanhada do aumento significante da expressão dos linfócitos T CD4+ e T CD8+ e em todos os grupos tratados houve redução significante dos níveis de TGF-? ativo nas lesões comparados aos dos controles. Por outro lado, não foi detectado IFN-? na lesão das patas de nenhum grupo dos animais tratados. A dosagem sérica de todos os camundongos tratados mostrou concentrações de TGO, TGP e uréia dentro dos valores de referência, indicando que os esquemas de tratamento a que os animais foram submetidos não levaram à hepato ou nefrotoxicidade. Os dados obtidos nesse trabalho demonstraram a eficiente ação inibitória do DPPE 1.2 sobre a infecção pela L. (L.) amazonensis em modelo murino previamente observada em nosso laboratório e a sua capacidade de modular o sistema imune do animal tratado. O tratamento com o complexo paladaciclo associado à rLdccys1 exerceu efeito leishmanicida somatório ao do DPPE 1.2, abrindo perspectivas para explorar o potencial dessa associação como mais uma alternativa para a quimioterapia da leishmaniose cutânea causada pela L. (L.) amazonensis.