Investigação de biomarcadores a partir do peptidoma sérico e mapeamento de proteases de pacientes com câncer gástrico

• Autor(a) principal: Oliveira, Talita Mendes De [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=7892094; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59807
• topic: Câncer Gástrico; Peptidoma Sérico; Proteases; Fosforilação; Gastric Cancer; Serum Peptidome; Proteases; Phosphorylation

Introdução: O câncer gástrico (CG) é a quinta neoplasia maligna mais diagnosticada e a terceira principal causa de morte associada a câncer, mundialmente. No Brasil, foi estimado 21.000 novos casos para o biênio 2018-2019. O CG é frequentemente diagnosticado em estádio avançado ocasionando redução nos índices de eficácia terapêutica e, portanto, a identificação de biomarcadores que possibilitem um diagnóstico pode resultar em uma melhor sobrevida. O objetivo deste estudo foi realizar uma análise comparativa dos peptídeos endógenos (peptidoma) séricos de pacientes diagnósticados com adenocarcinoma gástrico (ACG) e indivíduos sem tumor (controle), tal qual realizar o mapeamento das proteases envolvidas na produção destes peptídeos. Método: Foram utilizadas 15 amostras séricas tumorais (estádio I-IV) e 15 de controles, dos quais os peptídeos extraídos foram, posteriormente, agrupados randomicamente em 5 replicatas biológicas (n = 3) por grupo e submetidas à análise de nano cromatografia acoplada à espectrometria de massas em sequência (nanoLC-ESI-MS/MS), seguido pela predição das proteases baseada no peptidoma. A partir da análise de componente especial (PCA) baseado na intensidade dos íons resultantes, foi possível evidenciar a correlação entre os pools das amostras de cada grupo e diferenciação entre os mesmos. Resultados: Um total de 191 peptídeos foram identificados correspondendo aos produtos de clivagem de 36 proteínas envolvidas principalmente na degranulação de plaquetas e neutrófilos, regulação de exocitose, atividade proteolítica e resposta imune. Foram preditas 29 serino-, 19 metalo-, 8 cisteíno- e 3 aspartil-protease, em que a protombina plasminogênio, MMP14, MMP7 e MMP3 foram associadas ao maior número de clivagens. A partir da quantificação relativa dos peptídeos (método label-free quantification), 33 peptídeos apresentaram diferenças significativas (fold change ≥ 1,5; p-value < 0,05), sendo 19 aumentados e 14 reduzidos em amostras de ACG. As sequências identificadas com aumento relativo em ACG pertencem ao receptor Poli-Ig, Cistatina S e Complemento C3, enquanto as reduzidas são oriundas da Protrombina, Apolipoproteina-AI, Fator de coagulação XIII, Inibidor de cadeia pesada da alfa tripsina, Alfa-2-HS-glicoproteína e Transtirretina. Além destas, os Fibrinogênios A e B originaram a maioria dos peptídeos, tendo diferenças significativas em ambos os grupos variando de acordo com o tamanho. As sequências de maior comprimento foram reduzidas em amostras de ACG e as menores aumentadas. Usando esses peptídeos, 9 proteases tiveram atividades preditas aumentadas em ACG. Adicionalmente, foi verificado o aumento do fosfopeptídeo 20ADpSGEGDFLAEGGGVR35 (Fibrinopeptídeo A) nas amostras de ACG, enquanto a forma não fosforilada foi mensurada de forma reduzida. Conclusões: A comparação entre os peptidomas permitiu constatar a presença de peptídeos que podem ser usados como possíveis indicadores de tumorigênese. Aumentos da atividade proteolítica e fosforilação do fibrinopeptídeo A podem ser marcadores séricos tumorais.