Complexo burkholderia cepacia: identificação, caracterização do perfil de sensibilidade aos antimicrobianos e avaliação dos mecanismos de resistência a trimetoprim/sulfametoxazol

• Autor(a) principal: Fehlberg, Lorena Cristina Corrêa [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/23265; https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=918271
• topic: Complexo Burkholderia cepacia; Testes de sensibilidade microbiana; Combinação Trimetoprima-Sulfametoxazol; Farmacorresistência bacteriana

O objetivo deste estudo foi caracterizar a identificação, o perfil de sensibilidade aos antimicrobianos, a similaridade genética e os mecanismos de resistência à trimetoprim/sulfametoxazol (SXT) entre os isolados clínicos do complexo Burkholderia cepacia (CBc). Metodologia: Foram avaliados 82 isolados clínicos do CBc recuperados de pacientes atendidos em dois hospitais universitários localizados na região sudeste do Brasil. A identificação bacteriana foi realizada pelo sequenciamento do gene recA e pela espectrometria de massas MALDI-TOF MS. O perfil de sensibilidade aos antimicrobianos foi determinado para ceftazidima, cloranfenicol, levofloxacina, meropenem, minociclina, ticarcilina/ácido clavulânico e SXT. Os resultados do perfil de sensibilidade também foram comparados entre quatro técnicas distintas, microdiluição em caldo, diluição em ágar, Etest e disco difusão, sendo a microdiluição em caldo considerada a técnica referência. A concordância geral e por categoria de sensibilidade, assim como as taxas de erros, foram calculadas de acordo com as recomendações do CLSI M23-A3. Os genes que conferem resistência aos betalactâmicos e ao SXT foram pesquisados por meio das técnicas de PCR e sequenciamento dos respectivos amplicons. A similaridade genética entre os isolados que carreavam genes de resistência foi determinada por PFGE. O DNA plasmidial e cromossomal dos isolados foram extraídos utilizando as técnicas de Kieser e kits comerciais, respectivamente. A localização dos genes de resistência foi determinada por Southern blot e hibridização utilizando sondas específicas. O contexto genético dos genes de resistência encontrados entre os isolados do CBc foi determinado por PCR e sequenciamento das regiões conservadas 3’CS e 5’CS do integron de classe 1. A técnica de conjugação foi realizada utilizando como amostra receptora E.coli J53. Resultados: Foram identificadas, pelo sequenciamento do gene recA, B. cenocepacia (n=44), B. multivorans (n=12), B. vietnamiensis (n=10), B. contaminans (n=9) e B. cepacia (n=7). Comparando os resultados obtidos pelo recA com aqueles do MALDI-TOF MS, 100% e 75,6% dos isolados foram concordantes na identificação ao nível de gênero e espécie, respectivamente. Boas taxas de sensibilidade foram encontradas para ceftazidima (86,6%), meropenem (87,8%), minociclina (87,8%) e SXT (97,6%). A concordância geral entre as técnicas avaliadas foi maior que 93% entre microdiluição em caldo e diluição em ágar, exceto para cloranfenicol (89%). Entre a técnica referência e os resultados obtidos pelo Etest, a concordância geral foi maior que 92%, exceto para ceftazidima (78%), SXT (80,4%) e cloranfenicol (85,3%). A concordância por categoria entre microdiluição em caldo e disco difusão foi maior que 90% para a maioria dos antimicrobianos testados, exceto para cloranfenicol (52,4%), SXT (74,4%) e levofloxacina (83,3%). Dois isolados (B. cenocepacia e B. cepacia) apresentaram resistência ao SXT e carreavam o gene dhfr22 inserido em um integron que classe 1. Entre os isolados resistentes à ceftazidima (7,3%), em apenas um (B. cenocepacia) foi detectado o gene blaOXA-10-like, também inserido em um integron de classe 1 o qual continha um gene cassete que confere resistência aos aminoglicosídeos, aadA1. De acordo com os resultados da hibridização, blaOXA-10-like estava inserido em um plasmídeo de ~70 Kb. Entretanto, não conseguimos realizar a transferência deste plasmídeo pela técnica de conjugação. Os dois isolados de B. cenocepacia que carreavam genes de resistência apresentaram perfil clonal semelhante pelo PFGE. Conclusões: O MALDI-TOF MS demonstrou ser uma excelente técnica alternativa para a identificação dos isolados do CBc. Boas taxas de sensibilidade foram observadas para os antimicrobianos usualmente empregados no tratamento das infecções causadas por estes micro-organismos. Em geral, foi observada boa concordância entre as técnicas de sensibilidade avaliadas neste estudo, exceto para as metodologias Etest e disco difusão na predição da sensibilidade ao SXT. O gene dhfr22 demonstrou ser o principal mecanismo entre os isolados resistentes ao SXT. De acordo com os nossos conhecimentos, descrevemos, pela primeira vez, a presença do gene blaOXA-10-like em um isolado clínico do CBc.