Clonagem e expressão de um antígeno quimérico contendo segmentos das glicoproteínas e1 e e2 do envelope do vírus da hepatite C
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Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16706 https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.318 |
Resumo: | Approximately 150 million people are infected chronically with hepatitis C virus (HCV). The development of vaccines has been hampered by the high genetic variability of the virus as well as by the lack of suitable animal models. In this study, we describe the construction of an artificial antigen containg segments of the HCV glicoproteins E1 and E2, expressed in bacterial system as a fusion protein (GST-E1E2), six and eight residues of histidine (6xhis and 8xHis). These segments we were selected by their ability to elicit neutralizing antibodies, described in scientific articles. Immunogenicity of GST-E1E2 was assessed by means of inoculation of mice and testing protein in the serum of these animals by ELISA against four synthetic peptides (I to IV) corresponding to segments E1E2 present in the sequence. Statistically significant reactivity was observed only against peptides I, II and IV compared between sera of immunized group and that GST-E1E2 immunized with GST. The serum was shown to have the highest reactivity by ELISA was used in indirect immunofluorescence (IFI) against CHO-K1 cells transfected with plasmid EFJFH c-NS2, which express the structural proteins of HCV, and also shown to be reactive, confirming that the observed ELISA was specific. These results indicate that some of the segments E1E2 present in the sequence and analyzed in this study were able to induce the production of antibodies against HCV. |
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2016-06-22T18:46:41Z2014-10-172016-06-22T18:46:41Z2014-05-29FROELICH, Loiane. Clonagem e expressão de um antígeno quimérico contendo segmentos das glicoproteínas e1 e e2 do envelope do vírus da hepatite C. 2014. 47 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014. Disponível em: https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.318https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16706https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.318Approximately 150 million people are infected chronically with hepatitis C virus (HCV). The development of vaccines has been hampered by the high genetic variability of the virus as well as by the lack of suitable animal models. In this study, we describe the construction of an artificial antigen containg segments of the HCV glicoproteins E1 and E2, expressed in bacterial system as a fusion protein (GST-E1E2), six and eight residues of histidine (6xhis and 8xHis). These segments we were selected by their ability to elicit neutralizing antibodies, described in scientific articles. Immunogenicity of GST-E1E2 was assessed by means of inoculation of mice and testing protein in the serum of these animals by ELISA against four synthetic peptides (I to IV) corresponding to segments E1E2 present in the sequence. Statistically significant reactivity was observed only against peptides I, II and IV compared between sera of immunized group and that GST-E1E2 immunized with GST. The serum was shown to have the highest reactivity by ELISA was used in indirect immunofluorescence (IFI) against CHO-K1 cells transfected with plasmid EFJFH c-NS2, which express the structural proteins of HCV, and also shown to be reactive, confirming that the observed ELISA was specific. These results indicate that some of the segments E1E2 present in the sequence and analyzed in this study were able to induce the production of antibodies against HCV.Aproximadamente 150 milhões de pessoas estão infectadas cronicamente pelo vírus da hepatite C (HCV). O desenvolvimento de vacinas tem sido dificultado pela variabilidade genética do vírus, bem como pela falta de modelos animais apropriados. Neste estudo, é descrita a construção de um antígeno artificial contendo segmentos das glicoproteínas E1 e E2 do HCV, expresso em sistema bacteriano fundido com a enzima glutationa S-transferase (GST-E1E2). Estes segmentos foram selecionados pela sua capacidade de induzir anticorpos neutralizantes, descrita em artigos científicos. A imunogenicidade da GST-E1E2 foi avaliada por meio de inoculação da proteína em camundongos e testando-se o soro desses animais por ELISA contra quatro peptídeos sintéticos (I a IV) correspondentes a segmentos presentes na sequência de E1E2. Foi observada reatividade estatisticamente significante somente contra os peptídeos I, II e IV em comparação entre os soros do grupo imunizado com GST-E1E2 e daquele imunizado com GST. O soro que mostrou ter a maior reatividade por ELISA foi utilizado em imunofluorescência indireta (IFI) contra células CHO-K1 transfectadas com o plasmídeo EFJFH c-NS2, que expressa as proteínas estruturais do HCV, e também mostrou ser reativo, confirmando que o observado por ELISA foi específico. Esses resultados indicam que alguns dos segmentos presentes na sequência E1E2 e analisados neste estudo foram capazes de induzir a produção de anticorpos contra o HCV.Mestre em Imunologia e Parasitologia Aplicadasapplication/pdfporUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia AplicadasUFUBRCiências BiológicasVírus da hepatite CGlicoproteínas E1 e E2ImunogenicidadeProteína recombinanteHepatite CGlicoproteínasHepatitis C virusGlycoproteins E1 and E2ImmunogenicityRecombinant proteinCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADAClonagem e expressão de um antígeno quimérico contendo segmentos das glicoproteínas e1 e e2 do envelope do vírus da hepatite Cinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisYokosawa, Jonnyhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723270U5Borges, Lizandra Ferreira de Almeida ehttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4758802J4Domingues, André Luiz da Silvahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4707745D8http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4313273E2Froelich, Loiane81761566info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUTHUMBNAILClonagemExpressaoAntigeno.pdf.jpgClonagemExpressaoAntigeno.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1191https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/16706/3/ClonagemExpressaoAntigeno.pdf.jpg373ba28e4d79b7219d31158da4a0a403MD53ORIGINALClonagemExpressaoAntigeno.pdfapplication/pdf1286697https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/16706/1/ClonagemExpressaoAntigeno.pdf279a47094ac12d9a43568b286ba31fafMD51TEXTClonagemExpressaoAntigeno.pdf.txtClonagemExpressaoAntigeno.pdf.txtExtracted texttext/plain99234https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/16706/2/ClonagemExpressaoAntigeno.pdf.txtbdc06b2f30b22d420834f38e04c029c4MD52123456789/167062021-08-06 14:36:35.913oai:repositorio.ufu.br:123456789/16706Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-08-06T17:36:35Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
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Clonagem e expressão de um antígeno quimérico contendo segmentos das glicoproteínas e1 e e2 do envelope do vírus da hepatite C Froelich, Loiane Vírus da hepatite C Glicoproteínas E1 e E2 Imunogenicidade Proteína recombinante Hepatite C Glicoproteínas Hepatitis C virus Glycoproteins E1 and E2 Immunogenicity Recombinant protein CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA::IMUNOLOGIA APLICADA |
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