Clonagem de antígenos quiméricos contendo epítopos das glicoproteínas E1 e E2 do envelope do vírus da hepatite C e caracterização de suas propriedades imunogênicas através da imunização com DNA
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Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFU |
Texto Completo: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16597 https://doi.org/10.14393/ufu.te.2014.113 |
Resumo: | Approximately 130 million people are infected chronically with hepatitis C virus (HCV). The development of vaccines has been hampered by the high genetic variability of the virus as well as by the lack of suitable animal models. In this study, we describe the construction of an artificial antigen based in the nucleotide sequence of the strain JFH1 (genotype 2a) containing segments of the HCV glycoproteins E1 and E2 that have been reported to elicit neutralizing antibodies against HCV. The immunogenicity of the E1E2 antigen was assessed in BALB/c mice by DNA immunization given in three doses (homologous immunization). Also, another group of mice was immunized with two doses of DNA and one additional dose of bacteria-expressed E1E2 protein (heterologous immunization). The sera of immunized mice were tested by ELISA and reacted against the recombinant E1E2 protein as well as four synthetic peptides (I - IV) covering parts of the E1E2 sequence. In addition, the antibodies present in some sera of both immunized groups of mice reacted against viral proteins in Huh7.5 cells producing JFH1 strain HCV in immunofluorescence assay. Moreover, the sera of animals had antibodies with virus-neutralizing capacity as evidenced by a reduction in approximately 40% of viral infection in cell culture. Our results demonstrate the ability of an artificial antigen, administered as DNA vaccine, to elicit specific antibodies with neutralizing capacity against HCV glycoprotein(s). Further investigations are still needed to explore the cellular immune response elicited by this antigen. |
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The immunogenicity of the E1E2 antigen was assessed in BALB/c mice by DNA immunization given in three doses (homologous immunization). Also, another group of mice was immunized with two doses of DNA and one additional dose of bacteria-expressed E1E2 protein (heterologous immunization). The sera of immunized mice were tested by ELISA and reacted against the recombinant E1E2 protein as well as four synthetic peptides (I - IV) covering parts of the E1E2 sequence. In addition, the antibodies present in some sera of both immunized groups of mice reacted against viral proteins in Huh7.5 cells producing JFH1 strain HCV in immunofluorescence assay. Moreover, the sera of animals had antibodies with virus-neutralizing capacity as evidenced by a reduction in approximately 40% of viral infection in cell culture. Our results demonstrate the ability of an artificial antigen, administered as DNA vaccine, to elicit specific antibodies with neutralizing capacity against HCV glycoprotein(s). Further investigations are still needed to explore the cellular immune response elicited by this antigen.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoDoutor em Imunologia e Parasitologia AplicadasAproximadamente 130 milhões de pessoas estão cronicamente infectadas pelo vírus da hepatite C (HCV). O desenvolvimento de uma vacina tem sido dificultado pela variabilidade genética do vírus, bem como pela falta de modelos animais apropriados. Neste estudo, descrevemos a construção de um antígeno artificial baseado na sequência nucleotídica da cepa JFH1 (genótipo 2a), contendo segmentos das glicoproteínas E1 e E2 do HCV, que têm sido relacionados com a indução de anticorpos com capacidade vírus-neutralizante. A imunogenicidade do antígeno E1E2 foi avaliada em camundongos BALB/c através da imunização com DNA administrado em três doses (imunização homóloga). Também, outro grupo de camundongos foi imunizado com duas doses de DNA e uma dose adicional da proteína E1E2 expressa em bactérias (imunização heteróloga). Os soros dos animais imunizados foram testados por ELISA, e reagiram contra a proteína recombinante E1E2, bem como contra quatro peptídeos sintéticos (I - IV), cujas sequências abrangem partes de E1E2. Os anticorpos presentes em alguns soros dos dois grupos de camundongos reagiram contra as proteínas virais expressas em células Huh7.5 produtoras de HCVcc. Além disso, os soros dos animais apresentaram anticorpos com capacidade vírus-neutralizante, evidenciada pela redução da infecção viral em cultura de células de aproximadamente 40%. Os nossos resultados demonstraram a capacidade de um antígeno artificial, administrado como vacina de DNA, para induzir anticorpos específicos com capacidade neutralizante contra a(s) glicoproteína(s) do HCV. Investigações adicionais ainda são necessárias para explorar a resposta imune celular desencadeada por este antígeno.Universidade Federal de UberlândiaBRPrograma de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia AplicadasCiências BiológicasUFUYokosawa, Jonnyhttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4723270U5Domingues, André Luiz da Silvahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4707745D8Cunha Junior, Jair Pereira dahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4795802Y5Ho, Paulo Leehttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4780000Y6Jardim, Ana Carolina Gomeshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4710886P5Freitas, Guilherme Ramos Oliveira e2016-06-22T18:46:23Z2014-10-172016-06-22T18:46:23Z2014-08-28info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfapplication/pdfFREITAS, Guilherme Ramos Oliveira e. Clonagem de antígenos quiméricos contendo epítopos das glicoproteínas E1 e E2 do envelope do vírus da hepatite C e caracterização de suas propriedades imunogênicas através da imunização com DNA. 2014. 68 f. Tese (Doutorado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014. DOI https://doi.org/10.14393/ufu.te.2014.113https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/16597https://doi.org/10.14393/ufu.te.2014.113porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2021-07-27T14:16:31Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/16597Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-07-27T14:16:31Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
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