Uso da prática Diferential Display Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction (DDRT-PCR) em esclerose lateral amiotrófica (ALS)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cruz, Jaqueline das Dores Dias
Data de Publicação: 1999
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25728
Resumo: Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação)
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spelling 2019-07-03T23:35:02Z2019-07-03T23:35:02Z1999-09-02CRUZ, Jaqueline das Dores Dias. Uso da prática Diferential Display Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction (DDRT-PCR) em esclerose lateral amiotrófica (ALS). 34 f. Trabalho de Conclusão de Curso (Graduação em Ciências Biológicas) – Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 1999.https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/25728porUniversidade Federal de UberlândiaCiências BiológicasBrasilCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICAALSDDRT-PCRPolimorfismoUso da prática Diferential Display Reverse Transcriptase - Polymerase Chain Reaction (DDRT-PCR) em esclerose lateral amiotrófica (ALS)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisGoulart Filho, Luiz Ricardohttp://lattes.cnpq.br/6759395798493082Bonetti, Ana MariaParreira, Kleber SimônioCruz, Jaqueline das Dores DiasTrabalho de Conclusão de Curso (Graduação)A doença esclerose lateral amiotrófica (ALS — Amyotrophic Lateral Sclerosis), também chamada por Doença de Lou Gehrig, é caracterizada por uma desordem neurológica que causa uma degeneração progressiva dos neurônios motores da medula espinhal e cérebro, a qual resulta em paralisia e morte. A ALS pode ser familiar ou esporádica. Mutações no gene SODl (Superóxido Desmutase) foram associadas com muitos casos de ALS familiar. Em 1992, Liang descreveu a técnica Differential Display Reverse Transcriptase- Polymerase Chain Reaction (DDRT-PCR), que atualmente é uma das ferramentas mais eficiente para identificar e isolar genes diferencialmente expressos. O presente trabalho objetivou obter uma metodologia eficaz para extração de RNA total de amostras de sangue humano, como também encontrar condições ideais para realização da técnica DDRT—PCR com coloração por nitrato de prata. Também teve como objetivo, verificar a existência de polimorfismos nas amostras de quatro irmãos, sendo um afetado por ALS. O RNA total foi extraído com sucesso das amostras de sangue. Um teste com RNA extraído de sangue fresco e congelado a —80 ºC também foi realizado. O (DNA foi sintetizado por uma transcrição reversa e em seguida amplificado combinando “primers” oligo—dT (M) com oito “primers” arbitrários OPA (10 pb) e a marcação utilizada foi não radioativa por nitrato de prata. Quanto ao teste com sangue fresco e congelado, o padrão de bandas, referente ao RNA do primeiro, foi muito melhor que o padrão encontrado para o RNA de sangue congelado. Os resultados das amostras dos quatro irmãos evidenciaram polimorfismos que variaram para cada combinação de “primers". Alguns “primers ”arbitrários apresentaram melhores padrões de amplificações do que outros (OPAS 16, 17 e 18). Os fragmentos variaram em média de 50 a 600 pb e algumas bandas exclusivas do indivíduo afetado, como por exemplo um fragmento menor que 50 pb para a combinação Tu CC e OPA 18, outro de aproximadamente 250 pb para a combinação Tn CG e OPA 18, foram destacadas e supostamente estão relacionadas com a esclerose lateral amiotrófica. A técnica foi otimizada para RNA extraído de sangue humano e a coloração por nitrato de prata pode ser uma alternativa a marcação radioativa para realização do DDRT—PCR, mesmo não detectando todos os fragmentos existentes devido à sua baixa sensibilidade.34info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFULICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81792https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/25728/2/license.txt48ded82ce41b8d2426af12aed6b3cbf3MD52ORIGINALUsoPraticaDiferential.pdfUsoPraticaDiferential.pdfapplication/pdf6166293https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/25728/1/UsoPraticaDiferential.pdf9dfdd1298594ac7c1438a7d530328400MD51TEXTUsoPraticaDiferential.pdf.txtUsoPraticaDiferential.pdf.txtExtracted texttext/plain51366https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/25728/3/UsoPraticaDiferential.pdf.txt4433289ad26dbbf8402f74e6817516aaMD53123456789/257282019-07-04 03:06:46.216oai:repositorio.ufu.br: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Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2019-07-04T06:06:46Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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