Caracterização molecular dos mimetopos H2 (SAG2A) e B12 (SRS6) de moléculas de superfície de Toxoplasma gondii

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cunha Júnior, Jair Pereira da
Data de Publicação: 2005
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/27225
http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2005.2
Resumo: Toxoplasma gondii is a protozoan parasite that infects the majority of warm-blooded vertebrates. It actively penetrates in any nucleated cell using a surface antigen superfamily, including the typical evolutionary and developmental products expressed by SRS (SAG1-re!ated sequences) genes, as SAG1 and SAG2A molecules, which mediate host cell attachment and invasion. Considering that little is known about SRS epitopes, the main purpose of the present study was to characterize the epitopes recognized by A3A4 and A4D12 monoclonal antibodies (mAbs) by using phage display libraries. When evaluated by 1D and 2D electrophoresis, the A3A4 mAb recognized a conformational epitope shared by five isoforms of the SRS6, BSR4, SAG5A, SAG5C and SAG5D members of SRS superfamily from a monomeric (p30) or dimeric (p60) molecule. In contrast, a linear SAG2A epitope (p22) shared by two isoforms was recognized by A4D12 mAb and the epitope mapping showed a peptide core consensus at the DGSSA sequence that resulted in a considerable alignment with SAG2A located at its C-terminal domain (137-141 amino acids). Secretion and gliding assays revealed that both A3A4 and A4D12 epitopes are present in enriched excreted/secreted antigens (ESA). Also, they are shed in trials left by T. gondii during gliding motility. In addition, A3A4 and A4D12 epitopes are present in both type I and II genotypes of T. gondii, but no reactivity was detected in N. caninum or E. acervulina lysates, indicating these epitopes are species- but no strain-specific. Pretreatment of RH strain tachyzoites with A3A4 or A4D12 mAb did not show significant protection in C57BL6 mice against T. gondii infection, suggesting that the blockage of the epitopes seems that they do not interfere with infectivity of virulent RH strain in vivo.
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When evaluated by 1D and 2D electrophoresis, the A3A4 mAb recognized a conformational epitope shared by five isoforms of the SRS6, BSR4, SAG5A, SAG5C and SAG5D members of SRS superfamily from a monomeric (p30) or dimeric (p60) molecule. In contrast, a linear SAG2A epitope (p22) shared by two isoforms was recognized by A4D12 mAb and the epitope mapping showed a peptide core consensus at the DGSSA sequence that resulted in a considerable alignment with SAG2A located at its C-terminal domain (137-141 amino acids). Secretion and gliding assays revealed that both A3A4 and A4D12 epitopes are present in enriched excreted/secreted antigens (ESA). Also, they are shed in trials left by T. gondii during gliding motility. In addition, A3A4 and A4D12 epitopes are present in both type I and II genotypes of T. gondii, but no reactivity was detected in N. caninum or E. acervulina lysates, indicating these epitopes are species- but no strain-specific. Pretreatment of RH strain tachyzoites with A3A4 or A4D12 mAb did not show significant protection in C57BL6 mice against T. gondii infection, suggesting that the blockage of the epitopes seems that they do not interfere with infectivity of virulent RH strain in vivo.Tese (Doutorado)Toxoplasma gondii é um protozoário parasita que infecta a ampla maioria dos vertebrados homeotermos. Ele penetra ativamente em todas as células já estudadas, utilizando inicialmente uma superfamília de antígenos de superfície que inclui produtos evolucionariamente bem conservados expressos peios genes SRS (SAG1-related sequences), como as moléculas SAG1 and SAG2A, que participam da adesão e invasão das células hospedeiras. Levando-se em conta que pouca informação está disponível na literatura sobre os epitopos SRS, o objetivo do presente estudo foi caracterizar os epitopos reconhecidos pelos anticorpos monoclonais (mAbs) A3A4 e A4D12, utilizando a técnica de phage display. Quando avaliado por eletroforese uni- e bi-dimensional, o mAb A3A4 reconheceu um epitopo conformacional comum a cinco moléculas SRS6, BSR4, SAG5A, SAG5C and SAG5D, pertencentes à superfamília SRS, com componentes monoméricos (p30) or diméricos (p60) sendo detectados. Em contraste, um epitopo linear (p22) comum a duas isoformas de SAG2A foi reconhecido pelo mAb A4D12, sendo que o mapeamento epitopico identificou o peptídeo consenso DGSSA que apresentou um significante alinhamento com a região C-terminal da molécula de SAG2A, localizada na posição correpondente ao 137°-141° resíduos de aminoácidos. Ensaios de secreção e motilidade revelaram que os epitopos A3A4 e A4D12 estão presentes nos antígenos excretados/secretedos (ESA), e que eles fazem parte das trilhas deixadas por T. gondii durante sua motilidade. Os epitopos A3A4 e A4D12 estão presentes nas cepas de genótipos tipo I e II de 7. gondii, mas ausentes em N. caninum ou E. acervuíina, indicando que estes marcadores são espécie- mas não cepa-específicos. O tratamento prévio de taquizoítas da cepa RH com mAb A3A4 ou A4D12 não demonstrou uma proteção significativa em camundongos C57BL/6 infectados, sugerindo que o bloqueio destes epitopos parece não interferir com a infectividade in vivo desta cepa de 7. gondii.Universidade Federal de UberlândiaBrasilPrograma de Pós-graduação em Imunologia e Parasitologia AplicadasMineo, José Robertohttp://lattes.cnpq.br/2006638367304868Mortara, Renato ArrudaMonzani, Paulo SérgioGoulart Filho, Luiz RicardoSilva, Neide Maria daCunha Júnior, Jair Pereira da2019-10-23T13:13:25Z2019-10-23T13:13:25Z2005info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfCUNHA JÚNIOR, Jair Pereira da. Caracterização molecular dos mimetopos H2 (SAG2A) e B12 (SRS6) de moléculas de superfície de Toxoplasma gondii. 2005. 96 f. Tese (Doutorado Imunologia e Parasitologia Aplicadas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2019. DOI http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2005.2https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/27225http://dx.doi.org/10.14393/ufu.te.2005.2porhttp://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/3.0/us/info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFU2021-09-23T17:42:32Zoai:repositorio.ufu.br:123456789/27225Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-09-23T17:42:32Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false
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