Estudo da imunogenicidade das proteínas SAG1, SAG2 e SAG3 de Toxoplasma gondii expressas em vírus recombinantes e mapeamento de seus epítopos protetores

• Autor(a) principal: Erica Araujo Mendes
• Data de Publicação: 2006
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFMG
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/1843/UCSD-8BNPFP
• topic: Bioquímica; imunologia; Bioquímica; Toxoplasma gondii; Vacinas

As proteínas de superfície (SAGs) presentes em taquizoitos de T. gondii encontram-se envolvidas na ativação de resposta imune contra o parasita. No presente estudo nós avaliamos a capacidade de adenovírus recombinantes codificando os genes de SAG1, SAG2 e SAG3 em induzir a ativação de resposta imune humoral e celular, além de imunidade protetora contra cepa cistogênica do parasita. A ativação de resposta imune humoral foi avaliada em camundongos C57BL/6 vacinados com adenovírus recombinantes (AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3 ou AdCtrl) e a resposta imune celular foi avaliada tanto em BALB/c (resistentes) quanto em C57BL/6 (susceptíveis) à cepa ME49 de T. gondii. Peptídeos correspondentes a epítopos MHCI-restritos, específicos para os haplótipos H2-Db e H2-Ld, foram determinados para cada proteína, através da análise de seqüência no programa SYFPEITHI. Tais peptídeos foram produzidos por meio de síntese em fase sólida, de acordo com a metodologia Fmoc. Camundongos BALB/c e C57BL/6 receberam duas doses de 109 p.f.u. de AdSAG1, AdSAG2, AdSAG3 ou AdCTRL, com intervalo de seis semanas. Amostras de soro obtidas dos animais C57BL/6 quatro semanas após a última imunização foram submetidas a Western-blot contra lisado total de taquizoítos (TLA). Os resultados demonstraram que a imunização gerou anticorpos IgG específicos contra as três proteínas nesses animais. Duas a quatro semanas após a última imunização, esplenócitos de ambas as linhagens de camundongos foram coletados para ensaios de ELISPOT. Os esplenócitos foram reestimulados in vitro com os peptídeos sintéticos identificados no programa SYFPEITHI. A imunização com AdSAG1 levou a ativação de células T CD8+ produtoras de IFN-g em ambas as linhagens. Estas células se mostraram responsivas a um epítopo previamente identificado na seqüência da proteína SAG1. Camundongos C57BL/6 vacinados foram desafiados com a cepa ME49 duas semanas após o término do protocolo de imunização. Consistente com a capacidade de induzir ativação de resposta imune celular foi observada proteção parcial em camundongos C57BL/6 vacinados com AdSAG1, os quais apresentaram maior taxa de sobrevivência e menor número de cistos cerebrais se comparado ao grupo controle.