Purificação e caracterização bioquímica da moozincina, uma metaloprotease dependente de zinco presente na peçonha da serpente Bothrops moojeni (Caiçaca)
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Data de Publicação: | 2010 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15821 |
Resumo: | Bothrops snake venoms contain proteases that contribute to the local effects seen after envenoming. In this study, a non-hemorrhagic metalloprotease was isolated from the venom of B. moojeni. The enzyme was isolated by a combination of ion exchange and gel filtration chromatographies and named Moozincin. The enzyme was purified to homogeneity as judged by its migration profile in SDS PAGE stained with coomassie blue, and showed a molecular mass of about 30 kDa. Moozincin did not induce hemorrhage, blood clotting, defibrinating or phospholipase A2 activities, but displayed proteolytic activity on bovine fibrinogen. Moozincin cleaves the Aα-chain of fibrinogen first, followed by the Bβ-chain, and shows no effects on the γ-chain. The fibrinogenolytic activity of Moozincin was abolished after incubation with a chelating agent (EDTA, 1,10-phenantroline) β-mercaptoethanol, indicating that it is metal iondependent. In contrast, aprotinin and benzamidine did not affect these activities. Moozincin was active at pH 7 - 11 and was stable in solution at up to 50 °C; fibrinogenolytic activity was completely lost at ≥60 °C. Histological observations showed that Moozincin induces low myonecrosis upon intramuscular injection in mice evidenced by hyaline degeneration and leukocyte infiltrate. Moozincin induced cell alterations in lung, but not alter liver, kidney and heart cells. |
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2016-06-22T18:43:42Z2010-08-132016-06-22T18:43:42Z2010-07-20FONSECA, Kelly Cortes. Purification and functional characterization of a new non-hemorrhagic metalloprotease from Bothrops moojeni snake venom. 2010. 52 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biológicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2010.https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/15821Bothrops snake venoms contain proteases that contribute to the local effects seen after envenoming. In this study, a non-hemorrhagic metalloprotease was isolated from the venom of B. moojeni. The enzyme was isolated by a combination of ion exchange and gel filtration chromatographies and named Moozincin. The enzyme was purified to homogeneity as judged by its migration profile in SDS PAGE stained with coomassie blue, and showed a molecular mass of about 30 kDa. Moozincin did not induce hemorrhage, blood clotting, defibrinating or phospholipase A2 activities, but displayed proteolytic activity on bovine fibrinogen. Moozincin cleaves the Aα-chain of fibrinogen first, followed by the Bβ-chain, and shows no effects on the γ-chain. The fibrinogenolytic activity of Moozincin was abolished after incubation with a chelating agent (EDTA, 1,10-phenantroline) β-mercaptoethanol, indicating that it is metal iondependent. In contrast, aprotinin and benzamidine did not affect these activities. Moozincin was active at pH 7 - 11 and was stable in solution at up to 50 °C; fibrinogenolytic activity was completely lost at ≥60 °C. Histological observations showed that Moozincin induces low myonecrosis upon intramuscular injection in mice evidenced by hyaline degeneration and leukocyte infiltrate. Moozincin induced cell alterations in lung, but not alter liver, kidney and heart cells.As peçonhas de serpentes do gênero Bothrops contêm proteases que contribuem com efeitos locais vistos no envenenamento. Neste estudo, uma metaloprotease não hemorrágica foi isolada da peçonha de B.moojeni. Esta enzima foi isolada por uma combinação de cromatografia de troca iônica e exclusão molecular e nomeada moozincina. A enzima teve seu grau de pureza avaliado em SDS PAGE corado com azul brilhante de Comassie e mostrou uma massa molecular aparente de 30 kDA. A moozincina não induz hemorragia, atividade coagulante, desfibrinação ou atividade fosfolipásica, mas mostrou atividade proteolítica sobre fibrinogênio bovino. A moozincina degrada inicialmente a cadeia Aα do fibrinogênio, em seguida a cadeia Bβ e não mostra efeitos sobre a cadeia γ. A atividade da moozincina foi inibida após incubação com agentes quelantes (EDTA, 1,10 fenantrolina) e agente redutor β- mercaptoetanol) indicando ser uma protease dependente de íon metálico. Em contrapartida, a aprotinina e a benzamidina não afetaram sua atividade. A moozincina se apresentou ativa em pH 7.0 a 11, sendo estável em solução até 50 ºC. Sua atividade fibrinogenolítica foi completamente perdida em temperatura igual ou superior a 60 °C. Observações histológicas mostraram que a administração intramuscular de moozincina induziu baixa mionecrose, evidenciada por degeneração hialina e infiltração leucocitária. Moozincina induziu alterações celulares nos pulmões, mas não alterou fígado, rins e células cardíacas.Mestre em Genética e Bioquímicaapplication/pdfporUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em Genética e BioquímicaUFUBRCiências BiológicasBothrops moojeniVeneno de serpenteFibrinogenaseMetaloproteaseCobra venenosa - VenenoBothropsSnake venomMetalloproteaseCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICAPurificação e caracterização bioquímica da moozincina, uma metaloprotease dependente de zinco presente na peçonha da serpente Bothrops moojeni (Caiçaca)Purification and functional characterization of a new non-hemorrhagic metalloprotease from Bothrops moojeni snake venominfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisOliveira, Fábio dehttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799971D5Silva, Nilson Penhahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4789829J8Ávila, Veridiana de Melo Rodrigueshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4720590E9Soares, Andreimar Martinshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4792564Y7http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4259000A3Fonseca, Kelly Cortesinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUTHUMBNAILDiss Kelly.pdf.jpgDiss Kelly.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1224https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15821/3/Diss%20Kelly.pdf.jpgfaee9bebb766a98965a9b600b0f398e7MD53ORIGINALDiss Kelly.pdfapplication/pdf1587471https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15821/1/Diss%20Kelly.pdf7ed4a16d73cfff19841755226f57641fMD51TEXTDiss Kelly.pdf.txtDiss Kelly.pdf.txtExtracted texttext/plain78749https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/15821/2/Diss%20Kelly.pdf.txtc62f0d2e2335e0f0648636acc50d116eMD52123456789/158212017-06-26 15:48:17.735oai:repositorio.ufu.br:123456789/15821Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2017-06-26T18:48:17Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
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