Purificação e caracterização parcial de ATPase de encéfalo de rata

• Autor(a) principal: Santos, Ana Cecília Silva
• Data de Publicação: 1997
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFU
• Texto Completo: https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/29828; http://doi.org/10.14393/ufu.di.1997.17
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::GENETICA; Motores moleculares; Miosina; Cinesína; Ratos como animais de laboratório

Neste trabalho foi purificado e caracterizado parcialmente uma ATPase de cérebro de rata utilizando cpolunas de DEAE-Sepharose e fosfocelulose. Os cérebros foram homogeneizados em Tampão Imidazol pH 8,0 e centrifugados, a 4ºC, a 38.900 g X 40 minutos. O sobrenadante foi aplicado à uma coluna de DEAE-Sepharose e, ao “Flow Through” coletado foi adicionado sulfato de amônia em pó até atingir 35% de saturação. Após centrifugação, o sobrenadante obtido é aplicado em coluna de fosfocelulose centrifugação, o sobrenadante obtido é aplicado em coluna de fosfocelulose em pH 6,8 e proteínas retidas foram eluídas alterando o pH para 8,0. As frações eluídas desta coluna apresentam polipeptídeos de menor peso molecular entre 50 e 60 kDa. A fração enriquecida em atividade ATPásica possui as seguintes características: 1) Na concentração de 1,0 mM de substrato a atividade ATPásica é 2,5 vezes maior do que a atividade GTPásica; 2)Atividade MgATPásica é 20 vezes maior do que a atividade CaATPásica e não é sensível a Ca++ e Ca ++/CaM ; 3)Não apresentou estimulação por actina e não foi detectado atividade K-EDTA ATPásica; 4) Éinibida na presença de altas concentrações de sais (NaCI, KCI e KI 0,3M), fluoreto de alumínio e Triton X 100 0,2%; 5) Não é inibida pela azida e pelo vanadato; 6)A atividade é maior em pH ácido(pH 5,0).