BmooMPα-III: uma metaloprotease purificada da peçonha da serpente Bothrops moojeni
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Data de Publicação: | 2014 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Texto Completo: | https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12402 https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.191 |
Resumo: | Proteolytic enzymes from bothrops venom are responsible for the majority of local and systemic effects observed during the envenomation. In this work we describe the purification and characterization of a novel metalloproteinase from Bothrops moojeni snake venom. The enzyme, denoted BmooMPα-III, was purified by a combination of ion exchange (DEAE Sephacel), molecular exclusion (Shepadex G-75) and affinity (HiTrap Chelating HP) chromatographies. BmooMPα-III enzyme represents about 0.75% of the crude venom and shows a single band with an apparent molecular mass of 26 kDa when analyzed by SDS-PAGE, under reducing conditions. BmooMPα-III cleaves first the Aα chain, then βγ, but does not hydrolyzes the γ chain of bovine fibrinogen. Inhibition of fibrinogenolytic activity by metal ion chelating agent such as EDTA allow classifies BmooMPα-III as a metalloprotease. The enzyme was inhibited by β-mercaptoethanol, however, inhibitors such as, aprotinin, leupeptin and PMSF did not Affect the fibrinogenolytic activity. The enzyme is inactive at high temperatures (≥ 60 ° C) and shows maximum activity at pH around 7.0 to 10.0. BmooMPα-III cause toxic effect on liver and kidney cells, but does not alter the cells of the lungs and heart. Preliminary results show that the enzyme BmooMPα-III induces a drastic reduction in HeLa cells and it is able to cause desfibrinating in mice when administered ip. Therefore, it is expected that this enzyme may be of medical importance as a therapeutic agent in the treatment of thrombotic disorders and cancer. |
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2016-06-22T18:31:52Z2015-02-102016-06-22T18:31:52Z2014-02-28SILVA, Thalita Kristhina Alves. BmooMPα-III: uma metaloprotease purificada da peçonha da serpente Bothrops moojeni. 2014. 292 f. Dissertação (Mestrado em Ciências Biomédicas) - Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, 2014. Disponível em: https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.191https://repositorio.ufu.br/handle/123456789/12402https://doi.org/10.14393/ufu.di.2014.191Proteolytic enzymes from bothrops venom are responsible for the majority of local and systemic effects observed during the envenomation. In this work we describe the purification and characterization of a novel metalloproteinase from Bothrops moojeni snake venom. The enzyme, denoted BmooMPα-III, was purified by a combination of ion exchange (DEAE Sephacel), molecular exclusion (Shepadex G-75) and affinity (HiTrap Chelating HP) chromatographies. BmooMPα-III enzyme represents about 0.75% of the crude venom and shows a single band with an apparent molecular mass of 26 kDa when analyzed by SDS-PAGE, under reducing conditions. BmooMPα-III cleaves first the Aα chain, then βγ, but does not hydrolyzes the γ chain of bovine fibrinogen. Inhibition of fibrinogenolytic activity by metal ion chelating agent such as EDTA allow classifies BmooMPα-III as a metalloprotease. The enzyme was inhibited by β-mercaptoethanol, however, inhibitors such as, aprotinin, leupeptin and PMSF did not Affect the fibrinogenolytic activity. The enzyme is inactive at high temperatures (≥ 60 ° C) and shows maximum activity at pH around 7.0 to 10.0. BmooMPα-III cause toxic effect on liver and kidney cells, but does not alter the cells of the lungs and heart. Preliminary results show that the enzyme BmooMPα-III induces a drastic reduction in HeLa cells and it is able to cause desfibrinating in mice when administered ip. Therefore, it is expected that this enzyme may be of medical importance as a therapeutic agent in the treatment of thrombotic disorders and cancer.As enzimas proteolíticas presentes nas peçonhas botrópicas são responsáveis pela maioria dos efeitos locais e sistêmicos observados durante o envenenamento. Nesse trabalho, descrevemos a purificação e a caracterização de uma nova metaloprotease da peçonha da serpente Bothrops moojeni. A enzima, denominada de BmooMPα-III, foi purificada pela combinação das cromatografias de troca iônica (DEAE Sephacel), exclusão molecular (Sephadex G-75) e afinidade (HiTrap Chelating HP). A enzima BmooMPα-III representa cerca de 0,75 % da peçonha total e apresenta banda única com uma massa molecular aparente de 26 kDa, quando analisada por SDS-PAGE, sob condições redutoras. BmooMPα-III cliva primeiro a cadeia A, depois a B, mas não hidrolisa a cadeia do fibrinogênio bovino. A inibição da atividade fibrinogenolítica por agente quelante de íons metálicos como EDTA permite classificá-la como uma metaloprotease. A enzima também foi inibida pelo -mercaptoetanol, entretanto, inibidores de proteases tais como benzamidina, aprotinina, PMSF e leupeptina não afetam esta atividade. A enzima é inativa em altas temperaturas ( 60 oC) e apresenta atividade máxima em pH em torno de 7,0 10,0. BmooMPα-III causa efeito tóxico sobre as células hepáticas e renais, mas não altera as células dos pulmões e coração. Resultados preliminares mostram que a enzima BmooMPα-III induz uma drástica redução de células HeLa e é capaz de causar desfibrinogenação em camundongos, quando administrada i.p. Por esse motivo, é esperado que essa enzima possa ser de interesse médico, como um agente terapêutico no tratamento de desordens trombóticas e câncer.Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas GeraisMestre em Biologia Celular e Estrutural Aplicadasapplication/pdfporUniversidade Federal de UberlândiaPrograma de Pós-graduação em Biologia Celular e Estrutural AplicadasUFUBRCiências BiomédicasBothrops moojeniMetaloproteaseBmooMPα-IIICitologiaCobra - VenenoSerpente peçonhentaCNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::CITOLOGIA E BIOLOGIA CELULARBmooMPα-III: uma metaloprotease purificada da peçonha da serpente Bothrops moojeniinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisOliveira, Fábio dehttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4799971D5Costa, Júnia de Oliveirahttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4701853T9Santos Filho, Norival Alveshttp://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4102497P8http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4425377A4Silva, Thalita Kristhina Alves81761353info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UFUinstname:Universidade Federal de Uberlândia (UFU)instacron:UFUTHUMBNAILGeografiaProjetoBrasil_parte 1.pdf.jpgGeografiaProjetoBrasil_parte 1.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1120https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/7/GeografiaProjetoBrasil_parte%201.pdf.jpgd9ad3d56b8c86707eda0c9e478565e17MD57GeografiaProjetoBrasil_parte 2.pdf.jpgGeografiaProjetoBrasil_parte 2.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1504https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/8/GeografiaProjetoBrasil_parte%202.pdf.jpg96b7a9f782704fc215895fae069168b0MD58GeografiaProjetoBrasil_parte 3.pdf.jpgGeografiaProjetoBrasil_parte 3.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1385https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/9/GeografiaProjetoBrasil_parte%203.pdf.jpgc1a8e597122aa533f48d2051a59a1eafMD59ORIGINALGeografiaProjetoBrasil_parte 1.pdfapplication/pdf2598250https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/1/GeografiaProjetoBrasil_parte%201.pdf27303dc8fd02f1957e58aead647a7fbdMD51GeografiaProjetoBrasil_parte 2.pdfapplication/pdf4564991https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/2/GeografiaProjetoBrasil_parte%202.pdf85bbafcefacd1c5b89755f60d45b1547MD52GeografiaProjetoBrasil_parte 3.pdfapplication/pdf9423612https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/3/GeografiaProjetoBrasil_parte%203.pdfe933f34fd9ff870cf0bfed7cb252c883MD53TEXTGeografiaProjetoBrasil_parte 1.pdf.txtGeografiaProjetoBrasil_parte 1.pdf.txtExtracted texttext/plain421460https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/4/GeografiaProjetoBrasil_parte%201.pdf.txt4e3d659ad299786cddc964e240cf5b90MD54GeografiaProjetoBrasil_parte 2.pdf.txtGeografiaProjetoBrasil_parte 2.pdf.txtExtracted texttext/plain114338https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/5/GeografiaProjetoBrasil_parte%202.pdf.txt3ccb2c9a33b39d8b1533b12e72628fd8MD55GeografiaProjetoBrasil_parte 3.pdf.txtGeografiaProjetoBrasil_parte 3.pdf.txtExtracted texttext/plain51https://repositorio.ufu.br/bitstream/123456789/12402/6/GeografiaProjetoBrasil_parte%203.pdf.txt1abb17524afa00a251ba82b97dccaf75MD56123456789/124022021-08-02 11:20:23.43oai:repositorio.ufu.br:123456789/12402Repositório InstitucionalONGhttp://repositorio.ufu.br/oai/requestdiinf@dirbi.ufu.bropendoar:2021-08-02T14:20:23Repositório Institucional da UFU - Universidade Federal de Uberlândia (UFU)false |
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