Produção e caracterização bioquímica de xilanases produzidas pelo fungo isolado EA 1.3.1.
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Data de Publicação: | 2019 |
Tipo de documento: | Dissertação |
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Texto Completo: | https://acervo.ufvjm.edu.br/items/9b18331e-b363-43ba-b751-3a0d19e04687 |
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Marinho, Gessica OliveiraBenassi, Vivian MachadoRoa, Juan Pedro BretasBrito, Tássio OliveiraNelson, David LeeUniversidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)Benassi, Vivian Machado2021-02-12T14:28:13Z2021-02-12T14:28:13Z20192019-07-26MARINHO, Gessica Oliveira. Produção e caracterização bioquímica de xilanases produzidas pelo fungo isolado EA 1.3.1.. 2019. 82 p. Dissertação (Mestrado em Biocombustíveis) – Programa de Pós-graduação em Biocombustíveis, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, Diamantina, 2019.https://acervo.ufvjm.edu.br/items/9b18331e-b363-43ba-b751-3a0d19e04687O presente trabalho foi realizado com apoio da Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Brasil (CAPES) - Código de Financiamento 001.As biotecnologias relacionadas com as energias renováveis, tais como os biocombustíveis obtidos de fontes residuais, de baixo custo, e que representam tecnologias limpas, tornaram uma solução para os problemas ambientais. Assim, objetivou-se desenvolver um bioprocesso para obtenção de um extrato rico em xilanases fúngicas, determinando seus parâmetros físico-químicos de cultivo do microrganismo, além de caracterizar bioquimicamente o extrato bruto obtido. A otimização da produção xilanolítica foi obtida analisando o desenvolvimento do fungo diante das variações dos recursos disponíveis e com análise bioquímica do extrato bruto. Variou-se os meios de cultivo e tempo de crescimento, fonte de nitrogênio, de carbono, solução de sais, concentração de esporos e pH inicial do meio. A atividade xilanásica foi determinada pela formação dos açúcares redutores pela hidrólise do substrato xilana beechwood 1% (m/v) em tampão acetato de sódio 100 mM, pH 5,5, à 55 ºC, utilizando-se o ácido 3’,5’dinitrosalicílico como agente colorimétrico. A produção xilanolítica máxima foi obtida pelo fungo EA 1.3.1 em meio de cultura líquido Khanna enriquecido com solução de sais CP, durante quatro dias de forma estacionária, utilizando-se extrato de levedura como fonte de nitrogênio. A produção xilanolítica apresentou maiores níveis de atividade quando o microrganismo foi cultivado em meio contendo farelo de trigo com 25,63 U.mL quando comparada com as outras fontes testadas. Vale citar que, a palha de cana-de-açúcar e semente de abóbora também favoreceram a síntese enzimática e, portanto, podem ser utilizadas como fontes alternativas para a produção de xilanases. O pH inicial do meio de cultivo foi de 8,5 e a concentração ideal de inóculo tem ordem de grandeza de 10 esporos/mL. Após a otimização de cultivo, realizou-se a caracterização bioquímica das xilanases, observando-se que a temperatura e pH ideais de ensaio enzimático foram 65 °C e 6,5, respectivamente. Visualizou-se que à 50 °C o extrato enzimático apresentou-se estável, perdendo apenas 8% da sua atividade após 90 minutos de incubação e diminuindo sua atividade com exposição a temperaturas mais elevadas. As enzimas se apresentaram estáveis à pH 5,0, durante 90 minutos. Concluiu-se, assim, que o fungo isolado demonstrou elevada atividade xilanolítica, podendo ser produzido com custo reduzido, devido às fontes de carbono de baixo custo, além de apresentarem características importantes em processos industriais, como atividade enzimática em ampla faixa de temperatura e pH e estabilidade a temperatura.Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES)Dissertação (Mestrado) – Programa de Pós-graduação em Biocombustíveis, Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri, 2019.Renewable energy-related biotechnologies, such as biofuels from low-cost, residual sources that represent clean technologies, have become a solution to environmental problems. The objective of this work was to develop a bioprocess to obtain a concentrate rich in xylanases of fungal origin, determining its physicochemical parameters of microorganism cultivation for a higher xylanolytic activity, besides biochemically characterizing the crude extract obtained. The optimization of the xylanolytic production was obtained by analyzing the development of the fungus in face of the variations of available resources and with biochemical analysis of the crude extract. The means and time of culture, nitrogen source, carbon, salt solution, spore concentration and initial pH of the medium were varied. The xylanic activity was determined by the formation of the reducing sugars by the hydrolysis of the substrate xylan beechwood 1% (m / v) in 100 mM sodium acetate buffer, pH 5.5, at 55 ° C using 3 ', 5' dinitrosalicylic acid as colorimetric agent. The maximum xylanolytic production was obtained by the fungus EA 1.3.1 in Khanna liquid culture medium enriched with CP salts solution, for four days in a stationary way, using yeast extract as a nitrogen source. The xylanolytic production showed higher levels of activity when the microorganism was grown in medium containing wheat bran with 25.63 U.mL-1, when compared to the other sources tested. It is worth mentioning that sugarcane straw and pumpkin seed also favored enzymatic synthesis and therefore can be used as alternative sources for the production of xylanases. The initial pH of the culture medium was 8.5, and the optimum inoculum concentration had an order of magnitude of 105 spores / mL. After optimization of the fungus culture, the biochemical characterization of the xylanases was performed, observing that the ideal temperature and pH of the enzymatic assay were 65 ° C and 6.5, respectively. It was observed that at 50 ° C the enzymatic extract was stable, losing only 8% of its activity after 90 minutes of incubation and decreasing its activity with exposure to higher temperatures. The enzymes were stable at pH 5.0 for 90 minutes. It was concluded that the isolated fungus showed high xylanolytic activity and can be produced on a large scale with low cost, due to the low cost carbon sources for microorganism cultivation, besides presenting important characteristics in industrial processes such as enzymatic activity in wide range of temperature and pH and stability to temperature.porUFVJMA concessão da licença deste item refere-se ao à termo de autorização impresso assinado pelo autor, assim como na licença Creative Commons, com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri e o IBICT a disponibilizar por meio de seus repositórios, sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, e preservação, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessProdução e caracterização bioquímica de xilanases produzidas pelo fungo isolado EA 1.3.1.info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisEnzimasFungos filamentososResíduos agroindustriaisEnzymesXylanasesAgroindustrial residuesreponame:Repositório Institucional da UFVJMinstname:Universidade Federal dos Vales do Jequitinhonha e Mucuri (UFVJM)instacron:UFVJMTHUMBNAILgessica_oliveira_marinho.pdf.jpggessica_oliveira_marinho.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg2577https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/80e83221-9ddd-41b9-9128-075e4e454283/downloadef5921feb147b027ae94d9e099eec351MD57falseAnonymousREADORIGINALgessica_oliveira_marinho.pdfgessica_oliveira_marinho.pdfapplication/pdf985553https://acervo.ufvjm.edu.br//bitstreams/bcc53045-ec63-4581-9de8-0ea4c2fee729/download997ae2785f8a802ae8999d98bac358f3MD51trueAnonymousREADCC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain; 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