Morfogênese in vitro e transformação genética da Alfavaca (Ocimum selloi Benth)

• Autor(a) principal: Amaral, Cláudio Lúcio Fernandes
• Data de Publicação: 2001
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/10900
• topic: Morfogênese in vitro; Transformação Genética; Cultura de Tecidos; Biotecnologia; Alfavaca; Ocimum selloi; Ciências Biológicas

Foram estudados alguns fatores que influenciam a organogênese, bem como a regeneração in vitro desta espécie, visando fornecer subsídios à transformação genética. Analisando-se o efeito de concentrações de BAP na indução de multibrotações em segmentos caulinares nodais de O. selloi cultivados in vitro, evidenciou-se que quanto maior a concentração de BAP, tanto menor foi o comprimento dos brotos, porém maior o número de brotos. Menores concentrações de BAP relacionam-se a maiores pesos de matéria seca dos brotos. Estudando-se o efeito de concentrações de sacarose e sais no cultivo in vitro de segmentos caulinares nodais de O. selloi constatou-se que a concentração de 100 % de sais do meio MS combinada com a concentração 2 % de sacarose foi a melhor na propagação in vitro de O. selloi, em razão de se ter obtido brotos mais longos e com raízes grandes, resultando em maior peso do material vegetal. Observando-se o efeito de concentrações de ANA e BAP e da posição dos explantes na indução de organogênese in vitro em segmentos caulinares internodais de O. selloi verificou-se que o primeiro, o segundo e o terceiro segmentos caulinares internodais apresentaram, em meio de cultivo -1 -1 complementado com 1,00 mg L de ANA e 0,25 mg L de BAP, freqüência de calogênese de 60,00%, 50,00% e 60,00%, respectivamente. O primeiro, o segundo e o terceiro segmento caulinar internodal apresentaram, respectivamente, freqüência de organogênese de 93,33%, 73,33% e 73,33%, média de órgãos produzidos de 2,80, 1,80 e 1,80 e eficiência de organogênese de 2,60, 1,32 e 1,32 em meio de cultivo suplementado com 0,10 mg L -1 de ANA e 1,00 mg L -1 de BAP. Verificando-se o efeito de concentrações de ANA na indução do enraizamento em brotos de O. selloi, obtidos a partir de segmentos caulinares internodais cultivados in vitro, evidenciou-se que tanto o número de raízes quanto o comprimento de raízes foram crescentes à medida que elevou-se a concentração de ANA de 0,0 a 1,0 mg L -1 . Avaliando-se o efeito de agentes gelificantes na indução de organogênese em segmentos caulinares internodais de O. selloi cultivados in vitro, averigou-se que o primeiro segmento caulinar internodal comportou-se melhor na indução de brotos comparado ao segundo segmento caulinar internodal e combinado ao Phytagel - “Sigma” foi superior ao associado com Agar - “Merck”. O uso de higromicina com timentin foi mais eficiente que o de canamicina com timentin para a seleção de regenerantes, pois para inibir a organogênese usou-se 10 mg L -1 de higromicina com 300 mg L -1 de timentin e 100 mg L -1 de canamicina com 300 mg L -1 timentin. A freqüência de regeneração de brotos em meio seletivo contendo higromicina e timentin foi de 0,5%, enquanto que a de canamicina e timentin foi de 1,0%. Conclui-se que não foi possível obter plantas transgênicas, pois a transformação genética não foi mostrada pelo teste Gus, nem confirmada por PCR.