Potential use of multiplex real-time PCR to develop a kit for identification of beer-spoilage microorganisms

• Autor(a) principal: Machado, Túlio Iglésias
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: eng
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: https://locus.ufv.br//handle/123456789/32131; https://doi.org/10.47328/ufvbbt.2023.733
• topic: Cerveja - Microbiologia; Cerveja - Controle de qualidade; Reação em cadeia da polimerase multiflex; Microbiologia Agrícola

A cerveja é a bebida alcoólica mais consumida no mundo. Apesar de ser considerada uma bebida microbiologicamente estável devido às suas propriedades intrínsecas, como baixo pH, alto teor de CO2, compostos antimicrobianos provenientes do lúpulo e outros fatores, a contaminação microbiológica na cerveja ocorre, levando à produção de sabores indesejados como mudanças no sabor e aroma, viscosidade, acidificação, entre outros efeitos indesejados. Este estudo explora o uso do PCR em tempo real (qPCR) multiplex combinada com análise de High Resolution Melting (HRM) para a detecção e discriminação simultânea de gêneros de microrganismos contaminantes da cerveja. Sequências ortólogas foram identificadas usando a pipeline OrthoMCL para o design de primers. Os primers desenhados apresentaram alta especificidade, gerando curvas de melting distintas para cada gênero. A sensibilidade foi confirmada, com amplificação baixas concentrações de DNA. O alinhamento perfeito dos primers com regiões-alvo influenciou significativamente a sensibilidade. A abordagem multiplex qPCR-HRM demonstrou eficácia na detecção de microrganismos que contaminantes de cerveja em reações multiplex. No entanto, variações de sensibilidade entre os primers ressaltam a importância de um design cuidadoso para reações multiplex com primers dentro da mesma faixa de sensibilidade. Nossa pipeline é altamente adaptável e pode ser aplicado não apenas na detecção de vários microrganismos cervejeiros, mas também em outros segmentos da indústria alimentícia, indústria farmacêutica, óleo & gás, dentre outros, melhorando efetivamente medidas de controle de qualidade com custo competitivo com os métodos tradicionais. Palavras-chave: Microrganismos contaminantes de cerveja. Controle de qualidade. qPCR multiplex. HRM. Genes ortólogos.