Purification and characterization of an a-galactosidase from Aspergillus fumigatus

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Rezende, Sebastião Tavares de
Data de Publicação: 2005
Outros Autores: Guimarães, Valéria Monteze, Rodrigues, Marília de Castro, Felix, Carlos Roberto
Tipo de documento: Artigo
Idioma: eng
Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
Texto Completo: http://dx.doi.org/10.1590/S1516-89132005000200005
http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/25582
Resumo: O fungo termofílico Aspergillus fumigatus secreta as enzimas invertase (b-frutofuranosidase) e a-galactosidase (a-D-galactosídeo galactohi-drolase) que estão envolvidas na hidrólise completa dos oligossacarídeos de rafinose. A enzima a-galactosidase foi produzida em meio de cultura do fungo Aspergillus fumigatus crescido por 36 h a 42 °C em meio mineral mínimo contendo os açúcares galactose, ou melibiose, ou rafinose como fontes de carbono. A enzima foi purificada por filtração em gel, seguida por duas cromatografias de troca iônica. A massa molecular da a-galactosidase determinada por SDS-PAGE foi de 54,7 kDa. A atividade máxima da enzima purificada, utilizando o substrato r-nitrofenil-a-D-galactopiranosídeo (rNPGal) foi na faixa de pH entre 4,5 e 5,5 e a 55 °C. A enzima manteve aproximadamente 80% de sua atividade original mesmo após pré-incubação por 90 minutos a 50 °C. O valor de KM para o substrato rNPGal foi 0,3 mM. A enzima foi capaz de hidrolisar melibiose, mas sua atividade foi muito reduzida na presença do substrato rafinose.
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A atividade máxima da enzima purificada, utilizando o substrato r-nitrofenil-a-D-galactopiranosídeo (rNPGal) foi na faixa de pH entre 4,5 e 5,5 e a 55 °C. A enzima manteve aproximadamente 80% de sua atividade original mesmo após pré-incubação por 90 minutos a 50 °C. O valor de KM para o substrato rNPGal foi 0,3 mM. A enzima foi capaz de hidrolisar melibiose, mas sua atividade foi muito reduzida na presença do substrato rafinose.Aspergillus fumigatus secreted invertase (b-fructofuranosidase) and a-galactosidase enzymatic activities able to hydrolyzing raffinose oligosaccharides (RO). a-Galactosidase was induced by galactose, melibiose and raffinose, but galactose was the most efficient inducer. It was purified by gel filtration and two ion exchange chromatographies and showed Mw of 54.7 kDa. The purified enzyme showed maximal activity against p-nitrophenyl-a-D-galactopyranoside (pNPGal) at pH 4.5-5.5 and 55 °C, and retained about 80% of the original activity after incubation for 90 minutes at 50ºC. The KM for pNPGal was 0.3 mM. Melibiose was hydrolyzed by the enzyme but raffinose was very poor substrate.engBrazilian Archives of Biology and Technologyv. 48, n. 02, p. 195-202, mar. 2005Aspergillus fumigatusa-galactosidaseRaffinose oligosaccharidesPurification and characterization of an a-galactosidase from Aspergillus fumigatusinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/articleapplication/pdfinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:LOCUS Repositório Institucional da UFVinstname:Universidade Federal de Viçosa (UFV)instacron:UFVORIGINALartigo.pdfartigo.pdfTexto completoapplication/pdf93282https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/25582/1/artigo.pdf87eff4dcb427fdd145a0a6abb34dd432MD51LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain; charset=utf-81748https://locus.ufv.br//bitstream/123456789/25582/2/license.txt8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33MD52123456789/255822019-05-29 08:37:28.91oai:locus.ufv.br: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Repositório InstitucionalPUBhttps://www.locus.ufv.br/oai/requestfabiojreis@ufv.bropendoar:21452019-05-29T11:37:28LOCUS Repositório Institucional da UFV - Universidade Federal de Viçosa (UFV)false
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