Morfogênese in vitro e otimização do número de marcadores RAPD para estimação da diversidade genética em eucalipto

• Autor(a) principal: Picoli, Edgard Augusto de Toledo
• Data de Publicação: 2005
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://www.locus.ufv.br/handle/123456789/10514
• topic: Marcadores genéticos; Eucalipto - Morfogênese in vitro; Polimorfismo (Genética); Tecidos vegetais - Cultura e meios de cultura; Eucalipto - Melhoramento genético; Ciências Agrárias

Foram conduzidos experimentos de cultura de tecidos utilizando um genótipo híbrido de Eucalyptus grandis vs. E. smithii e sementes de um cruzamento controlado de E. grandis. Foram isoladas uma levedura e uma bactéria que têm dificultado a cultura in vitro e transformação genética do genótipo híbrido, sendo a bactéria identificada como Herbaspirillum huttiense (Leifson) Ding e Yokota. Dentre 34 antibióticos testados in vitro para o controle do crescimento de H. huttiense, 12 induziram halos de inibição. Sulfadiazina, estreptomicina, canamicina e penicilina foram selecionados para determinação da concentração inibitória mínima. Sulfadiazina, estreptomicina e canamicina induziram halos de inibição entre as concentrações de 256 e 512 mg L -1 , contudo, apresentaram apenas atividade bacteriostática. Penicilina não apresentou efeito bactericida ou bacteriostático em concentrações até 1024 mg L -1 . Cefotaxima, carbenicilina e timentin foram avaliados quanto ao seu efeito sobre a morfogênese in vitro de explantes de Eucalyptus grandis. Foi observado que carbenicilina e timentin, em concentrações até 600 mg L -1 , favoreceram a freqüência de explantes regenerando calos (50-70%) e a redução da necrose. Cefotaxima beneficiou a calogênese até 300 mg L -1 , concentração a partir da qual promoveu aumento dos calos necrosados (>60%). Explantes cotiledonares e de hipocótilos de E. grandis foram submetidos a altas concentrações de diferentes reguladores de crescimento (ABSA, AIA, AIB, ANA, 2,4-D, TDZ, ZEA, BAP e KIN) e a combinações de 10, 50 e 100 mg L -1 de 2,4-D e períodos de exposição de 6, 12, 24 e 48 horas. Plântulas intactas apresentaram resultados superiores (~7 raízes/explante) quanto à rizogênese adventícia comparadas a hipocótilos e cotilédones isolados (<1,5 raízes/explante). ABSA, AIA, AIB, ANA e 2,4-D aumentaram (>10 raízes/explante), enquanto TDZ, ZEA, BAP e KIN inibiram (<1 raízes/explante) de maneira significativa a indução de raízes adventícias. O alongamento de epicótilos também foi inibido por TDZ, KIN, 2,4-D, BAP e ABSA, enquanto o mesmo não ocorreu com AIA, AIB, ANA e ZEA. Foi observada uma maior eficiência de ABSA na indução do enraizamento, mesmo quando comparada à AIB. Houve um decréscimo no alongamento de epicótilos e no número médio de raízes por explante, e um aumento da necrose de explantes, com o aumento da exposição e da concentração de 2,4-D. Nos estudos com marcadores moleculares, foi determinado o perfil de 84 genótipos com base em marcadores RAPD. Foi gerado um total de 501 bandas, dos quais 450 (89,82%) foram polimórficas e 51 (10,18%) monomórficas. A análise de bootstrap com duzentas repetições para cada número de marcadores mostrou que um número de marcadores maior que 393 resultou em valores de estresse menores que 5%, menores que 5 para soma de quadrados e maiores que 0,95 para correlação. Comparando os índices de diversidade genética entre e dentro das sub- populações de E. grandis e E. urophylla, a maior parte da variabilidade foi encontrada dentro das sub-populações. Exceto para o índice de Shannon, os outros índices de variabilidade aumentaram quando os marcadores monomórficos foram retirados das análises. A análise de agrupamento baseada em marcadores RAPD demonstrou associação com a classificação taxonômica.