Integração de pAN7-1 no genoma de Magnaporthe grisea mediada por enzima de restrição

• Autor(a) principal: Marchi, Carlos E.
• Data de Publicação: 2006
• Outros Autores: Brommonschenkel, Sérgio H., Queiroz, Marisa V. de, Mizubuti, Eduardo S. G.
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: LOCUS Repositório Institucional da UFV
• Texto Completo: http://dx.doi.org/10.1590/S0100-41582006000300003; https://locus.ufv.br//handle/123456789/26751
• topic: Pyricularia grisea; P. oryzae; Brusone; Transformação de fungos; Integração mediada por enzimas de restrição; REMI; Fungi transformation; Restriction enzyme-mediated integration

Visando explorar a mutagênese insercional em Magnaporthe grisea, foram avaliadas a transformação dos protoplastos obtidos após adequação do protocolo e a eficiência da integração de pAN7-1 no genoma do ascomiceto na presença da enzima de restrição Hind III. Os protoplastos de M. grisea I-22 foram prontamente transformados para a resistência à higromicina. Quando o vetor linearizado com Hind III foi usado para transformar o fungo na presença de Hind III, a eficiência de transformação foi 1,1 a 8,1 vezes superior ao tratamento sem a adição da enzima. No geral, a melhor concentração de Hind III foi 5 unidades/reação de transformação. Tal concentração promoveu a produção média de 332 transformantes/µg de pAN7-1/107 protoplastos. A presença do gene de seleção hph no genoma de 18 indivíduos resistentes à higromicina foi confirmada por PCR.