Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Gomes, Rauciane
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Monografias da UnB
Texto Completo: http://bdm.unb.br/handle/10483/10444
Resumo: Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, 2014.
id UNB-2_be43e04e74b08c71f24ca36aa4065e6b
oai_identifier_str oai:bdm.unb.br:10483/10444
network_acronym_str UNB-2
network_name_str Biblioteca Digital de Monografias da UnB
repository_id_str 11571
spelling Gomes, RaucianeCharneau, Sébastien OlivierMotta, Flávia da Silva NaderGOMES, Rauciane. Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi. 2014. 37 f., il. Monografia (Bacharelado em Farmácia)—Universidade de Brasília, Ceilândia-DF, 2014.http://bdm.unb.br/handle/10483/10444Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, 2014.A doença de Chagas apresenta o Trypanosoma cruzi como seu agente etiológico. Ao longo de seu ciclo de vida complexo, o parasita possui quatro formas principais de desenvolvimento: epimastigota, tripomastigota metacíclico, tripomastigota sanguíneo e amastigota. As manifestações clínicas da doença podem ser divididas em três fases: aguda, fase crônica indeterminada e fase crônica digestiva e/ou cardíaca. As formas de transmissão podem ser vetorial, por transfusão sanguínea, doação de órgãos sólidos, por alimentos e bebidas contaminados e outros. Atualmente o tratamento baseia-se nos medicamentos Benzonidazol e Nifurtimox. Existem diversas classes de proteínas implicadas na diferenciação celular e dentre elas podemos destacar as fosfatases. Para este trabalho foram propostas a clonagem, a expressão heteróloga, a purificação em coluna de Agarose/Níquel2+, a citolocalização em diferentes formas evolutivas e a caracterização bioquímica da proteína Serina/Treonina fosfatase- PP2C. A proteína TcPP2C foi expressa, na sua forma recombinante, na fração solúvel (3h a 20°C). Purificamos a proteína recombinante, sendo a TcPP2C eluída em uma concentração de 20-30mM de Imidazol. Testes de atividade enzimática para a TcPP2C com o substrato p-nitrofenilfosfato mostraram a proteína ativa somente na presença de íons divalentes, em maior grau na presença de manganês em comparação com magnésio. A enzima apresenta maior atividade na presença de DTT e a pH 7,5. Os ensaios de imunofluorescência indicam uma localização pontual da TcPP2C na forma epimastigota, difusa em amastigota e não identificada em tripomastigota. Esses dados experimentais mostraram que a enzima recombinante possui as características bioquímicas da subfamília PP2C importante para a sinalização celular, e que a nativa está presente nas formas de vida replicativas do T. cruzi. TcPP2C poderia estar principalmente envolvida nas vias de sinalização da divisão celular e da amastigogênese.Submitted by Andrielle Gomes (andriellemacedo@bce.unb.br) on 2015-05-04T17:59:54Z No. of bitstreams: 1 2014_RaucianeGomes.pdf: 664673 bytes, checksum: d3c6d0bed387c69a774f7c10aebe3a17 (MD5)Approved for entry into archive by Luanna Maia(luanna@bce.unb.br) on 2015-05-18T13:52:30Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2014_RaucianeGomes.pdf: 664673 bytes, checksum: d3c6d0bed387c69a774f7c10aebe3a17 (MD5)Made available in DSpace on 2015-05-18T13:52:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2014_RaucianeGomes.pdf: 664673 bytes, checksum: d3c6d0bed387c69a774f7c10aebe3a17 (MD5)Chagas disease presents Trypanosoma cruzi as its etiological agent. During its complex life cycle, the parasite has four main forms of development: epimastigote, metacyclic trypomastigote, blood trypomastigote and amastigote. The clinical manifestations of the disease can be divided into three phases: acute, indeterminate chronic phase and digestive and / or cardiac chronic phase. The forms of parasite transmissions can be by vector feces, blood transfusion, solid organ donation, contaminated food and drinks and others. Currently, the disease’s treatment is based on the drugs Benznidazole and Nifurtimox. There are several classes of proteins implicated in cell differentiation and among them we can highlight the phosphatases. For this work, we proposed the initial study of a serine / threonine protein phosphatase- PP2C from T. cruzi – TcPP2C. The enzyme was cloned, expressed in a heterologous system and purified on a column of Agarose / + Níquel2 for further tests. Its citolocalization was determined at different developmental forms of the parasite and some biochemical features of the enzyme was proposed. The TcPP2C protein was expressed active in the soluble fraction of the bacteria (3h at 20 ° C). TcPP2C enzymatic activity tests with the substrate p-nitrophenyl phosphate was carried out in the presence of divalent ions, to a greater extent in the presence of manganese compared with magnesium. TcPP2C enzymatic activity is dependent of DDT and is optimal at pH 7.5. Immunofluorescence assays indicate a specific location of TcPP2C in the epimastigote form, diffuse location in the amastigote and it was not identified in trypomastigote forms. These experimental data showed that the recombinant enzyme has the biochemical characteristics of the subfamily PP2C. In a general way, this protein is important for cell signaling, and since it is present in native forms of replicative life of T. cruzi, TcPP2C could be primarily involved in signaling pathways and amastigogenesis.Chagas, Doença deTripanossoma cruziCaracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruziinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesis2015-05-18T13:52:30Z2015-05-18T13:52:30Z2015-05-18T13:52:30Z2014-11-12info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Biblioteca Digital de Monografias da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2014_RaucianeGomes.pdf2014_RaucianeGomes.pdfapplication/pdf664673http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/1/2014_RaucianeGomes.pdfd3c6d0bed387c69a774f7c10aebe3a17MD51CC-LICENSElicense_urllicense_urltext/plain49http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/2/license_url4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2fMD52license_textlicense_textapplication/octet-stream0http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/3/license_textd41d8cd98f00b204e9800998ecf8427eMD53license_rdflicense_rdfapplication/octet-stream23148http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/4/license_rdf9da0b6dfac957114c6a7714714b86306MD54LICENSElicense.txtlicense.txttext/plain1855http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/5/license.txt6bcfb301def62ae4ff639b22d49b2478MD5510483/104442017-07-31 09:38:56.293oai:bdm.unb.br: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Biblioteca Digital de Monografiahttps://bdm.unb.br/PUBhttp://bdm.unb.br/oai/requestbdm@bce.unb.br||patricia@bce.unb.bropendoar:115712017-07-31T12:38:56Biblioteca Digital de Monografias da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.en.fl_str_mv Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
title Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
spellingShingle Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
Gomes, Rauciane
Chagas, Doença de
Tripanossoma cruzi
title_short Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
title_full Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
title_fullStr Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
title_full_unstemmed Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
title_sort Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi
author Gomes, Rauciane
author_facet Gomes, Rauciane
author_role author
dc.contributor.advisorco.none.fl_str_mv Charneau, Sébastien Olivier
dc.contributor.author.fl_str_mv Gomes, Rauciane
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Motta, Flávia da Silva Nader
contributor_str_mv Motta, Flávia da Silva Nader
dc.subject.keyword.en.fl_str_mv Chagas, Doença de
Tripanossoma cruzi
topic Chagas, Doença de
Tripanossoma cruzi
description Monografia (graduação)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, 2014.
publishDate 2014
dc.date.submitted.none.fl_str_mv 2014-11-12
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2015-05-18T13:52:30Z
dc.date.available.fl_str_mv 2015-05-18T13:52:30Z
dc.date.issued.fl_str_mv 2015-05-18T13:52:30Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/bachelorThesis
format bachelorThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.citation.fl_str_mv GOMES, Rauciane. Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi. 2014. 37 f., il. Monografia (Bacharelado em Farmácia)—Universidade de Brasília, Ceilândia-DF, 2014.
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://bdm.unb.br/handle/10483/10444
identifier_str_mv GOMES, Rauciane. Caracterização bioquímica e citolocalização de uma Serina/Treonina Fosfatase – PP2C de Trypanosoma cruzi. 2014. 37 f., il. Monografia (Bacharelado em Farmácia)—Universidade de Brasília, Ceilândia-DF, 2014.
url http://bdm.unb.br/handle/10483/10444
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Monografias da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Biblioteca Digital de Monografias da UnB
collection Biblioteca Digital de Monografias da UnB
bitstream.url.fl_str_mv http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/1/2014_RaucianeGomes.pdf
http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/2/license_url
http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/3/license_text
http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/4/license_rdf
http://bdm.unb.br/xmlui/bitstream/10483/10444/5/license.txt
bitstream.checksum.fl_str_mv d3c6d0bed387c69a774f7c10aebe3a17
4afdbb8c545fd630ea7db775da747b2f
d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e
9da0b6dfac957114c6a7714714b86306
6bcfb301def62ae4ff639b22d49b2478
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Monografias da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv bdm@bce.unb.br||patricia@bce.unb.br
_version_ 1801492963291824128

Registros relacionados