Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lacerda, Valquíria Alice Michalczechen
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/8199
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010.
id UNB_06937556b5a63c4d92995a0146c85271
oai_identifier_str oai:repositorio.unb.br:10482/8199
network_acronym_str UNB
network_name_str Repositório Institucional da UnB
repository_id_str
spelling Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinosImpacts of using procaine as a DNA demethylating agent in bovine cell culture sistemGenética molecularDNAClonagem molecularGeneDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010.Após a fecundação natural ou a clonagem por transferência nuclear, um padrão epigenético preexistente deve sofrer uma reprogramação correta para garantir o desenvolvimento embrionário. Contudo, essa reprogramação é ineficiente na clonagem, pois o carioplasto possui um padrão metilação do DNA diferente dos gametas. Acredita-se num aumento da eficiência da clonagem de mamíferos se os carioplastos utilizados possuírem um DNA hipometilado. Este é o primeiro estudo a utilizar a procaína como agente desmetilante no cultivo in vitro em linhagem celular de fibroblastos de bovinos. Os objetivos foram avaliar os efeitos da procaína no cultivo in vitro sobre a viabilidade celular, avaliar a integridade cromossômica e analisar o padrão de metilação no DNA para as regiões diferencialmente metiladas (DMRs) dos genes imprinting IGF2 e XIST, por tratamento com bissulfito de sódio seguido de seqüenciamento, em linhagem celular de Bos taurus indicus. O cultivo celular com a procaína apresentou crescimento celular e a suplementação com 0,1 e 0,5 mM levou a um aumento no número de células viáveis em relação ao grupo controle e ao tratamento com 2,0 mM (P≤0,05). A quantidade de células totais foi menor apenas para o grupo com suplementação de 2,0 mM (P≤0,01). A citogenética não mostrou diferença entre os grupos. O padrão de metilação não foi diferente para as DMRs dos genes avaliados. Existe um efeito benéfico nas células que receberam os tratamentos com 0,1 mM ou 0,5 mM de procaína, por existir um aumento da quantidade de células viáveis sem apresentar anomalias cromossômicas. Há a possibilidade de ter ocorrido uma desmetilação global, que não foi detectada nas regiões analisadas. A suplementação do meio de cultivo com procaína aumentou a viabilidade de fibroblastos in vitro de bovinos, sem alterar a integridade cromossômica. Isso é importante, pois os próximos estudos poderão contribuir, por exemplo, com um aumento dos índices da transferência nuclear de célula somática, maior obtenção de mamíferos transgênicos e possivelmente de células-tronco a partir de células diferenciadas. ______________________________________________________________________________ ABSTRACTAfter natural fertilization and cloning by nuclear transfer, an epigenetic pattern must be reprogrammed to guarantee viable embryo development. This is the first study to use procaine as a demethylation agent in in vitro culture of of cattle fibroblast cell line. The aim was to investigate the effects of procaine in fibroblast cell line, to evaluate the chromosome integrity and to analyze DNA methylation patterns for DMRs of IGF2 and XIST genes imprinting, by bisulphite tratament followed by sequencing, in Bos taurus indicus. The cell culture with procaine was viable and the supplementation with 0.1 and 0.5 mM led to an increase in the number of cells with intact membrane in comparison to control group and to the treatment with 2.0 mM (P ≤ 0.05). The amount of total cells was lower only for the group supplemented with 2.0 mM (P ≤ 0.01). Cytogenetics showed no difference between groups The methylation pattern was not different for the DMR genes evaluated. We notice a beneficial effect on cells that received treatments with 0.1 mM or 0.5 mM procaine, because there is an increase in number of viable cells which did not present chromosomal abnormalities. It may have occurred a global demethylation, which was not detected in the analyzed regions. Supplementation of medium culture with procaine increased the viability of in vitro culture of bovine fibroblasts, with no alteration in chromosomal integrity. The results obtained here may contribute to increase the levels of cloning and transgenic mammals and possibly stem cells from differentiated cells.Rumpf, RodolfoLacerda, Valquíria Alice Michalczechen2011-06-03T20:22:36Z2011-06-03T20:22:36Z2011-06-032010-03-24info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfLACERDA, Valquíria Alice Michalczechen. Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos. 2010. xvi, 88f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2010.http://repositorio.unb.br/handle/10482/8199info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-13T20:52:11Zoai:repositorio.unb.br:10482/8199Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-13T20:52:11Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.none.fl_str_mv Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
Impacts of using procaine as a DNA demethylating agent in bovine cell culture sistem
title Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
spellingShingle Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
Lacerda, Valquíria Alice Michalczechen
Genética molecular
DNA
Clonagem molecular
Gene
title_short Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
title_full Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
title_fullStr Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
title_full_unstemmed Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
title_sort Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos
author Lacerda, Valquíria Alice Michalczechen
author_facet Lacerda, Valquíria Alice Michalczechen
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Rumpf, Rodolfo
dc.contributor.author.fl_str_mv Lacerda, Valquíria Alice Michalczechen
dc.subject.por.fl_str_mv Genética molecular
DNA
Clonagem molecular
Gene
topic Genética molecular
DNA
Clonagem molecular
Gene
description Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, 2010.
publishDate 2010
dc.date.none.fl_str_mv 2010-03-24
2011-06-03T20:22:36Z
2011-06-03T20:22:36Z
2011-06-03
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv LACERDA, Valquíria Alice Michalczechen. Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos. 2010. xvi, 88f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2010.
http://repositorio.unb.br/handle/10482/8199
identifier_str_mv LACERDA, Valquíria Alice Michalczechen. Impactos do uso da procaína como agente desmetilante de DNA no sitema de cultivo celular de bovinos. 2010. xvi, 88f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Molecular)-Universidade de Brasília, Brasília, 2010.
url http://repositorio.unb.br/handle/10482/8199
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Repositório Institucional da UnB
collection Repositório Institucional da UnB
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv repositorio@unb.br
_version_ 1814508298183901184

Registros relacionados