Efeitos da criopreservação na viabilidade de fibroblastos de felinos silvestres

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Arantes, Letícia Gobbi
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/33737
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018.
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spelling Efeitos da criopreservação na viabilidade de fibroblastos de felinos silvestresFelinos silvestresGermoplasmaCriopreservação de órgãos, tecidos, etc.Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2018.A conservação de material genético de animais silvestres em botijões criogênicos, formando os bancos de germoplasma, representa uma alternativa viável para conservação das espécies e uma garantia para manutenção da diversidade biológica. Há uma necessidade de se criar protocolos de criopreservação para os diversos tipos celulares. O objetivo deste estudo é avaliar o melhor protocolo de criopreservação para manutenção da viabilidade de fibroblastos extraídos das espécies de onça preta (Panthera onca), Gato-do-mato (Leopardus tigrinus) e Gato palheiro (Leopardus colocolo) e caracterizar morfologicamente essas células. Os fibroblastos, isolados a partir de biópsias de peles já se encontravam criopreservados, em nitrogênio líquido, a uma temperatura de - 196ºC. Os fibroblastos foram descongelados, e em um primeiro momento do estudo, feita a curva de crescimento, para acompanhamento do potencial de crescimento celular em um período de 8 dias. Nenhuma das espécies atingiu confluência no cultivo, ao final do oitavo dia, porém as culturas apresentaram crescimento exponencial até as primeiras 50 horas e, após isso, houve uma diminuição nos crescimentos. Ao observar as células em microscopia de campo claro e microscopia eletrônica de varredura, foi possível perceber uma diferença morfológica entre os fibroblastos dos três felídeos. As células de L. colocolo apresentavam-se fusiformes e com as características projeções citoplasmáticas comumente encontradas em fibroblastos. Já as células do L. tigrinus são mais esféricas, com ramificações curtas, enquanto as da P. onca são fibroblastos com aparência fusiforme com longas ramificações. Com a microscopia eletrônica de transmissão, foi possível identificar que os fibroblastos estavam com intensa atividade celular, demonstrada pela presença de inúmeras vesículas digestivas, vacúolos e grânulos de secreção. As superfícies das células apresentaram projeções percebida nos outros dois tipos de microscopia. Em relação à criopreservação, não houve diferenças significativas entre as concentrações de 2,5%, 5% e 10% de DMSO para as espécies L. colocolo e L. tigrinus, sendo ambas as concentrações eficientes. Para o material de P. onca, o crioprotetor mais eficiente também foi o DMSO, porém, nas concentrações de 2,5% e 10%. O CryoSOfree™, foi eficiente apenas para a espécie L. colocolo e L. tigrinus. O aprimoramento de protocolos técnicos irá permitir a reprodução direcionada de animais de interesse e este trabalho poderá contribuir na preservação da fauna silvestre tanto brasileira quanto mundial, bem como a otimização dos estudos, em se estabelecendo protocolos que garantam o maior sucesso no cultivo das células.Cryopreservation of genetic material from wild animals, known as germplasm banks, are a viable form of species conservation and biological diversity safeguarding measure. Development of suitable cryopreservation protocols for each cell type is highly necessary considering genetic information banks. This study aims to determine which protocol is best at maintaining cell viability on fibroblasts of the following species; Jaguar (Panthera onca), Northern Tiger Cat (Leopardus tigrinus) and Pampas Cat (Leopardus colocolo) and characterize these cells morphologically. Morphology was examined under Light microscopy, Transmission Electron Microscopy and Scanning Electron Microscopy. Fibroblasts were isolated from skin biopsy and were already cryopreserved on liquid nitrogen (- 196ºC). After thawing, the growth curve was determined for growth potential in eigth days. None of the species reached confluence before the eighth day. Cultured cells presented exponential growth until the first 50 hours. After this period, reduction of growth speed was noted. Microscopy analysis made possible to note variation between the three wild cat’s fibroblasts. L. colocolo cells are fusiform and presents several cytoplasmic projections common to fibroblasts. L. tigrinus cells are more spherical with short ramifications. P onca fibroblasts are fusiform with longer ramifications. Using Transmission Electron Microscopy, it is noted that digestive vesicles, vacuoles and secretion granules are common, an indicative of intense cellular activity. In relation to cryopreservation, there were no significative differences between the concentrations of, 2.5%, 5% and 10% of DMSO for the L. coloclo and L. tigrinus, both concentrations being efficient in cryoprotecting the fibroblasts from these species. On the other hand, P. onca fibroblasts, were better preserved with solutions contaning 2.5% and 10% DMSO. CryoSOfree™ was efficient to cryopreserve L. colocolo and L. tigrinus fibroblasts. Protocol enhancement will provide the necessary conditions to reproduction for species of interest both on local native fauna and worldwide fauna. Academic studies are also directly enhanced by optimization of such protocols.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Programa de Pós-Graduação em Biologia AnimalBáo, Sônia NairArantes, Letícia Gobbi2019-01-04T11:18:00Z2019-01-04T11:18:00Z2019-01-042018-07-27info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfARANTES, Letícia Gobbi. Efeitos da criopreservação na viabilidade de fibroblastos de felinos silvestres. 2018. 59 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal)-Universidade de Brasília, Brasília, 2018.http://repositorio.unb.br/handle/10482/33737A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-01-31T17:14:14Zoai:repositorio.unb.br:10482/33737Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-01-31T17:14:14Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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