Extração, caracterização e avaliação do potencial de regeneração celular de extrato bruto de semente de Bixa Orellana L.

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Santos, Carolina Ramos dos
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49997
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade Gama, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2023.
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spelling Extração, caracterização e avaliação do potencial de regeneração celular de extrato bruto de semente de Bixa Orellana L.Urucum (Bixa orellana L.)Regeneração celularMétodos de extraçãoDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade Gama, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Biomédica, 2023.Úlcera de Pé Diabético (UPD) representa um elevado fator de risco para amputação e está entre as principais causas de hospitalização em diabéticos, culminando em alto custo para o Sistema Único de Saúde (SUS). Assim, esta moléstia representa um grave problema de saúde público,suscitando a necessidade de investimento público para o desenvolvimento de pesquisas voltadas para a busca de estratégias terapêuticas curativas. Nosso grupo desenvolveu um sistema terapêutico para neoformação tecidual o qual foi denominado Rapha® plus, que consiste no uso concomitante de fototerapia e curativo baseado em biomembrana de látex natural (BLN), oriundo de Hevea brasiliensis, contendo lipossomas com curcumina (Curcuma longa). Os resultados foram muito promissores, visto que a cicatrização com este sistema foi cerca de 70% superior à do tratamento convencional adotado como padrão-ouro pelo SUS. Todavia, este curativo não apresentou efeito antimicrobiano. Por isso, a associação de bioativoscom atividade antimicrobiana poderia ser útil e favorecer um efeito sinérgico na promoção da cicatrização, dado que infecções bacterianas estão relacionadas com o agravamento da ferida e o aumento das chances de amputações. Neste trabalho, propõe-se a extração, caracterização e avaliação da biocompatibilidade, potencial antioxidante e para regeneração celular do extrato de semente de urucum (Bixa orellana). Extrato de urucum apresenta bioativos com propriedades antioxidante e antimicrobiana. Neste estudo, será utilizado extrato bruto de sementes de urucum (Bixa orellana L.), obtidos de forma comercial por meio de doação pela empresa New Max® ou por meio de extração química por solvente. As sementes de urucum foram obtidas de comunidade extrativista quilombola. A extração dos compostos das sementes, por meio de solvente, foi realizada com os solventes de Hexano, Acetato de Etila e Etanol nas temperaturas de 50°C e 130°C para definição do protocolo de extração mais eficiente. Para avaliação da composição química do extrato e validação do método de extração, realizaram-seanálises por meio de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE) e Espectrofotometria. Com base nos resultados, os métodos de extração de biocompostos de interesse, como os carotenoides bixina e norbixina, foram eficientes. O extrato de urucum obtido por meio da extração com etanol a 50°C apresentou o maior rendimento (7,69 g) e teor de extrato (57,5%), dado que o tempo de retenção de bixina foi mais próximo ao padrão comercial deste biocomposto. Por isso, esse extrato foi utilizado para realização das análises de biocompatibilidade in vitro de queratinócitos e fibroblastos, por meio dos ensaios de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-ilo)-2,5-difeniltetrazólio (MTT) e de regeneração celular por meio de“Scratch assay”. Além disso, avaliou-se o potencial antioxidante do extrato. Foram testadas doses de 2,5 a 80 µg/mL e observou-se viabilidade celular acima de 80%, exceto na dose de 80 µg/mL. Com isso, foi selecionada a dose de 10 µg/mL para realização do ensaio de migração celular. Para avaliação da atividade antioxidante do extrato, utilizou-se uma técnica de ressonância magnética eletrônica, mas não foi possível detectar atividade antioxidante na dose de 1 mg/mL. Também foi realizado outro método para avaliação de sequestro de radicais livres (DPPH) e notou-se cerca de 50% de atividade antioxidante em comparação com o controle (ácido ascórbico) após 30 minutos de exposição a 10 e 100 µg/ml de extrato. Concluiu-se queo método de extração de biocompostos do extrato de urucum utilizando-se o solvente etanol a 50ºC foi o método com maior rendimento. Além disso, pôde-se concluir que o extrato obtido por esse método é biocompatível nas doses de até 80 µg/ml e que apresenta significativaatividade antioxidante e potencial para regeneração tecidual. Portanto, o extrato de urucum apresenta elevado potencial para associação a curativos, dado que a propriedade antioxidante é muito útil para o processo de cicatrização.Diabetic Foot Ulcer (DFU) represents a high-risk factor for amputation and is among the leading causes of hospitalization in diabetics, culminating in an excessive cost to the Unified Health System (SUS). Thus, this disease represents a serious public health problem, raising the need for public investment in the development of research aimed at finding curative therapeutic strategies. Our group has developed a therapeutic system for tissue neoformation named Rapha® Plus. It consists of the concomitant use of phototherapy and a dressing based on natural latex biomembrane (BLN) from Hevea brasiliensis, containing liposomes with curcumin (Curcuma longa). The results were very promising since the healing with this system was about 70% higher than the conventional treatment adopted as the gold standard by SUS. However, this dressing did not show an antimicrobial effect. Therefore, the association of bioactives with antimicrobial activity could be useful and favor a synergistic effect in the promotion of healing since bacterial infections are related to wound worsening and increased chances of amputations. In this work, we propose the extraction, characterization, and evaluation of the biocompatibility and antioxidant potential for cell regeneration of annatto seed extract (Bixa Orellana L.). The annatto extract has bioactives with antioxidant and antimicrobial properties. In this study, the crude extract of annatto (Bixa orellana L.) seeds, obtained commercially through donation by the New Max® company or through chemical solvent extraction, will be used. The annatto seeds were obtained from an extractive quilombola community. The solvent extraction of the compounds from the seeds was performed with the solvents Hexane, Ethyl Acetate, and Ethanol at temperatures of 50°C and 130°C to define the most efficient extraction protocol. For the evaluation of the chemical composition of the extract and validation of the extraction method, analyses were performed using High-Performance Liquid Chromatography (HPLC) and Spectrophotometry. Based on the results, the extraction methods for biocompounds of interest, such as the carotenoids bixin and norbixin, were efficient. The annatto extract, obtained by extraction with ethanol at 50°C, showed the highest yield (7.69 g) and extract content (57.5%), since the retention time of bixin was closest to the commercial standard of this biocompound. Therefore, this extract was used to perform the in vitro biocompatibility analyses of keratinocytes and fibroblasts, by means of MTT assays, and cell regeneration by means of the "Scratch assay". Additionally, the antioxidant potential of the extract was evaluated. Doses from 2.5 to 80 µg/mL were tested, and cell viability above 80% was observed, except at the 80 µg/mL dose. Thus, the dose of 10 µg/mL was selected to perform the cell migration assay. To evaluate the antioxidant activity of the extract, an electron magnetic resonance technique was used, but it was not possible to detect antioxidant activity at the dose of 1 mg/mL. Another method was also performed to evaluate free radical scavenging (DPPH), and about 50% of antioxidant activity compared to the control (ascorbic acid) was observed after 30 minutes of exposure to 10 and 100 µg/mL of extract. It was concluded that the method of extraction of biocompounds from annatto extract using the solvent ethanol at 50°C was the method with the highest yield. Moreover, it could be concluded that the extract, obtained by this method, is biocompatible and doses of up to 80 µg/mL and that it presents significant antioxidant activity and potential for tissue regeneration. Therefore, the annatto extract presents high potential for association with curatives, given that the antioxidant properties are particularly useful for the healing process.Faculdade UnB Gama (FGA)Programa de Pós-Graduação em Engenharia BiomédicaCarneiro, Marcella Lemos Brettascrsbiotec@hotmail.comSantos, Carolina Ramos dos2024-08-19T18:14:34Z2024-08-19T18:14:34Z2024-08-192023-06-21info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSANTOS, Carolina Ramos dos. Extração, caracterização e avaliação do potencial de regeneração celular de extrato bruto de semente de Bixa Orellana L. 2023. 84 f., il. Dissertação (Mestrado em Engenharia Biomédica) — Universidade de Brasília, Brasília, 2023.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49997porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-08-19T18:14:34Zoai:repositorio.unb.br:10482/49997Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-08-19T18:14:34Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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