Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Sprícigo, José Felipe Warmling
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/10293
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011.
id UNB_423985918b0c3f6d77e1732c3276ec3a
oai_identifier_str oai:repositorio.unb.br:10482/10293
network_acronym_str UNB
network_name_str Repositório Institucional da UnB
repository_id_str
spelling Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e molecularesVitrification of bovine oocytes at different meiotic stages using Cryotop method: assesmente of morphological molecular and functional damagesBovino - reproduçãoCriopreservação de órgãos, tecidos, etc.OvócitoDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011.A vitrificaçào com cryotop surgiu como uma opçào promissora para a criopreservaçào de ovócitos, por minimizar efeitos negativos e melhorar as taxas de sobrevivência. O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da vitrificaçào em diferentes momentos da maturação in vitro (MTV), quanto às características morfológieas, funcionais e moleculares, em ovócitos bovinos. Foram utilizados complexos-cumulus-ovócitos (CCOs) obtidos de ovários de abatedouio. Paia os experimentos 1 e 2, os ovócitos foram distribuídos em 4 grupos: controle (GC), não vitrificado; 0 hora vitrificado (VO); S horas vitrificado (VS) e 22 horas vitrificado (V22). Todos os grupos vitrificados foram desvitrifícados e retornaram para a MrV até completar 24 horas. Para a avaliação da cromatina, CCOs foram desnudados, fixados e corados com lacmoide. Para a taxa de fecundação, ovócitos foram submetidos à fecundação in vitro (FIV), e após 18 horas de co-cultivo com os espermatozóides foram fixados e corados com lacmoide. O desenvolvimento embrionário foi avaliado, pelas taxas de clivagem e blastocistos em D2. D7 e D8, após a inseminação (pi). Para análise estatística foi empregado o teste Qui-quadrado (P<0,05). Quanto ao experimento 3. primeiramente foi quantificada a expressão de genes ligados à apoptose (Caspase-3 e P-53) e ao controle epigenético (HDAC 2, Dnmt-1 e SUV39H1) em ovócitos maturados m vitro por : 0 (GCO), 8 (GC E), 22 (GC22) e 24 horas (GC24). Posteriormente, foi avaliado o efeito da vitrificaçào em diferentes momentos da MIV (0, 8 e 22 horas) na expressão desses mesmos genes. Para isso ovócitos de todos os grupos vitrifícados e do controle foram coletados ás 24 horas de MIV. A avaliação da expressão gênica. foi realizada por qPCR e os dados analisados por ANOVA one-way. (P<0,0S). A capacidade do ovócito de atingir Mil, após a maturação, clival e se desenvolver até blastocisto foi superior no grupo controle (P<0,05) comparado aos grupos vitrifícados. não havendo diferenças significativas entre estes (P>0.05). Já a taxa de fecundação, apesar de ser superior no grupo controle (P<0.05) o grupo VO apresentou a menor porcentagem de ovócitos fecundados e maior de ovócitos degenerados (P<0,05). comparado aos demais grupos. Quanto ao perfil de expressão gêmea em ovócitos durante a MIV. foi observado que os níveis de transcritos do gene Caspase-3 estavam aumentados (P<0,05). nos grupos GC22 e GC24. comparados á GCO e GCS, também foi observado um aumento (P<0.05) da expressão do gene Dnmt-1. nos grupos GC8. GC22 e GC24 comparados ao GCO. Entretanto, não foi observada alteração na abundância dos transcritos em nenhum dos grupos submetidos à vitnficação (P>0,0:j), comparados ao CG24. Conclui-se que. apesar dos baixos resultados, a vitnficação pode ser empregada para a conservação de ovócitos bovinos, independente do momento da MIV. Os níveis de transcritos avaliados nào foram alterados em resposta à vitrificaçào. Entretanto, foi constatado um aumento na expressão da Caspase-3 e Dnmt-1, durante a MIV. ______________________________________________________________________________ ABSTRACTVitrification by cryorop method has emerged as a promising option for oocytes cryopreservation, by minimizing negative effects and improving survival rates. The aim of this research was to evaluate the effect of vitrification at different tunes point during in vitro maturation (TVM) on functional, morphological and molecular characteristics of bovine oocytes. For all the experiments cumulus-oocytes-complexes (COCs) were obtained from slaughterhouse ovaries. In first and second experiments, oocytes were distributed into 4 groups: control non-vitrified(C&); 0 hour vitrified (VO); 8 hours vitrified (VS) and 22 hours vitrified (V22). In all groups oocytes were vitrified and wanned, and then returned to incubator until 24 hours of IVM. For chromatin evaluation, COCs were denuded, fixed and stained with lacmoid. To evaluate fertilization rates, oocytes, were fixed and stained with lacmoid 18 hours after in vitro insemination (pi). Embryonic development was accessed by cleavage and blastocyst rates at D2. D7 and D8 (pi). Data were analyzed by Chi-square test (P <0.05). A third experiment was designed to evaluated inRNA expression of apoptosis (Caspase-3 and P-53) and epigenetic control related genes (HDAC 2, SUV39H1 and Dnmtl).First gene expression was quantified at different time points during oocyte IVM: 0 (CGO). 8 (CG 8), 22 (CG22) and 24 hours (CG24). Then, the effect of vitrification at different moments of IVM (0, 8 and 22 hours) on genes expression was studies. Gene expression was performed by qPCR and data were analyzed by one-way ANOVA (P <0.05).. The ability of the oocyte to reach Mil after maturation, to cleave and to develop to blastocyst w:as higher in CG (P <0.05), compared to vitrified groups, which did not differ among them (PDode, Margot Alves NunesSprícigo, José Felipe Warmling2012-04-20T15:27:01Z2012-04-20T15:27:01Z2012-04-202011-12-16info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSPRÍCIGO, José Felipe Warmling. Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop: avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares. 2011. xvii, 70 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal)—Universidade de Brasília, 2011.http://repositorio.unb.br/handle/10482/10293info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-13T12:30:33Zoai:repositorio.unb.br:10482/10293Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-13T12:30:33Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.none.fl_str_mv Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
Vitrification of bovine oocytes at different meiotic stages using Cryotop method: assesmente of morphological molecular and functional damages
title Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
spellingShingle Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
Sprícigo, José Felipe Warmling
Bovino - reprodução
Criopreservação de órgãos, tecidos, etc.
Ovócito
title_short Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
title_full Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
title_fullStr Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
title_full_unstemmed Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
title_sort Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop : avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares
author Sprícigo, José Felipe Warmling
author_facet Sprícigo, José Felipe Warmling
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Dode, Margot Alves Nunes
dc.contributor.author.fl_str_mv Sprícigo, José Felipe Warmling
dc.subject.por.fl_str_mv Bovino - reprodução
Criopreservação de órgãos, tecidos, etc.
Ovócito
topic Bovino - reprodução
Criopreservação de órgãos, tecidos, etc.
Ovócito
description Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2011.
publishDate 2011
dc.date.none.fl_str_mv 2011-12-16
2012-04-20T15:27:01Z
2012-04-20T15:27:01Z
2012-04-20
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv SPRÍCIGO, José Felipe Warmling. Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop: avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares. 2011. xvii, 70 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal)—Universidade de Brasília, 2011.
http://repositorio.unb.br/handle/10482/10293
identifier_str_mv SPRÍCIGO, José Felipe Warmling. Vitrificação de ovócitos bovinos em diferentes estágios da meiose pelo método de cryotop: avaliação de danos morfológicos, funcionais e moleculares. 2011. xvii, 70 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciência Animal)—Universidade de Brasília, 2011.
url http://repositorio.unb.br/handle/10482/10293
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Repositório Institucional da UnB
collection Repositório Institucional da UnB
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv repositorio@unb.br
_version_ 1814508177072324608

Registros relacionados