Acurácia da qPCR associada ao cultivo no meio Novy-MacNeal-Nicolle no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Bergmann, Jaqueline Osiro
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/36002
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019.
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spelling Acurácia da qPCR associada ao cultivo no meio Novy-MacNeal-Nicolle no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americanaLeishmanioseLeishmaniose tegumentar americanaLeishmaniose - diagnósticoDiagnóstico molecularDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Ciências Médicas, 2019.FUNDAMENTOS: A sensibilidade dos métodos de cultura em meio sólido para o diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana (LTA) é limitada pela capacidade visual do avaliador. OBJETIVO: Neste trabalho, foi testada a acurácia da reação em cadeia da polimerase em tempo real (qPCR) baseada em ensaios com sonda de hidrólise TaqMan acoplada à cultura em meio Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) modificado para o diagnóstico de LTA. MÉTODOS: Pacientes com apresentação clínica compatível com LTA foram alocados nos grupos controle e grupo LTA. Foram comparadas a acurácia da avaliação microscópica da cultura e da qPCR de aspirados de lesões cultivados. Os ensaios quantitativos e qualitativos foram realizados utilizando uma sonda de hidrólise específica e primers que amplificam o kDNA de Leishmania braziliensis. RESULTADOS: Cinquenta e oito pacientes foram incluídos no estudo, sendo 38 no grupo LTA e 20 no grupo controle. A análise combinada da qPCR + cultura melhorou significativamente a acurácia do diagnóstico em comparação com a análise visual microscópica (p = 0,006). Ao comparar a avaliação microscópica e a qPCR + cultura, foi observado um ganho de sensibilidade de 44.7% (17 de 38 pacientes com LTA; IC 95% = 28,6 - 61.7) para 68.4% (26 de 38 pacientes com LTA; IC 95% = 51.3 - 82.5), com uma pequena redução de especificidade de 100% (20 de 20 controles; 95% IC = 83.2 - 100) para 95% (19 de 20 controles; 95% IC = 75.1 - 99.9), respectivamente. A quantidade mínima de parasitos por tubo de cultura detectada por microscopia foi de 15. Entretanto, a sensibilidade foi de apenas 30% quando menos de 1.000 parasitos foram quantificados. CONCLUSÃO: A avaliação microscópica das amostras de cultura na LTA pode ter sua sensibilidade limitada pela não visualização de parasitos escassos ou pela não diferenciação de parasitos amastigotas em formas promastigotas.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).BACKGROUND: The sensitivity of culture methods in solid medium for the diagnosis of American tegumentary leishmaniasis (ATL) is limited by the visual capacity of the evaluator. OBJECTIVE: It was tested the accuracy of a TaqMan-based real-time polymerase chain reaction (qPCR) coupled to culture in Novy-MacNeal-Nicolle (NNN) medium modified for the diagnosis of ATL. METHOD: Patients with a clinical presentation compatible with ATL were allocated into ATL and control groups. The accuracy of microscopic and qPCR processing of cultured lesion aspirates were compared. Quantitative and qualitative assays were performed using a specific hydrolysis probe and primers amplifying the kDNA minicircle of Leishmania braziliensis. RESULTS: Fifty-eight patients were included in the study, with 38 in the ATL group and 20 in the control group. The combined qPCR + culture analysis significantly improved the accuracy of diagnosis compared to the microscopic analysis (p=0.006). When comparing microscopic and qPCR + culture processing, we observed a sensitivity gain from 44.7% (17 of 38 ATL patients; 95% CI = 28.6 - 61.7) to 68.4% (26 of 38 ATL patients; 95% CI = 51.3 - 82.5), with a small specificity reduction from 100% (20 of 20 controls; 95% CI = 83.2 - 100) to 95% (19 of 20 controls; 95% CI = 75.1 - 99.9), respectively. The minimum quantity of parasites per culture tubes detected by microscopic evaluation was 15, but the sensitivity was only 30% when fewer than 1,000 parasites were quantified. CONCLUSION: The microscopic evaluation of culture samples in ATL may have its sensitivity limited by the non-visualization of scarce parasites or by the non-differentiation of amastigote parasites into promastigote forms.Faculdade de Medicina (FM)Programa de Pós-Graduação em Ciências MédicasSampaio, Raimunda Nonata RibeiroGomes, Ciro MartinsBergmann, Jaqueline Osiro2019-12-18T19:33:52Z2019-12-18T19:33:52Z2019-12-182019-02-26info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfBERGMANN, Jaqueline Osiro. Acurácia da qPCR associada ao cultivo no meio Novy-MacNeal-Nicolle no diagnóstico da leishmaniose tegumentar americana. 2019. 89 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências Médicas)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.https://repositorio.unb.br/handle/10482/36002A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-09-19T15:19:14Zoai:repositorio.unb.br:10482/36002Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-09-19T15:19:14Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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