Estudo do envolvimento da via ERK1/2 sobre a resposta adipogênica e anti-inflamatória de agonistas de PPARγ em macrófagos e adipócitos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Fereira, Anna Paula Barros
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47548
Resumo: Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 20__.
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Estudos anteriores mostraram que GQ-16 apresentou atividade agonista parcial e específica em PPARγ, (TZDs) e efeitos semelhantes às TZDs na redução da glicemia e com menor efeito9 adipogênico. Muitos dos efeitos dos agonistas de PPARγ são explicados pela alteração da expressão gênica. Contudo, estudos demonstram que os agonistas podem mediar efeitos rápidos e que envolvem uma série de eventos intracelulares. No entanto, ainda não foi explorado se estes mecanismos não-genômicos de agonistas PPARγ poderiam explicar os efeitos benéficos do agonista parcial do PPARγ GQ-16. Objetivo: Este estudo buscou analisar os efeitos de agonistas total e parcial de PPARγ sobre a ativação da via ERK1/2 e o envolvimento dessa via na expressão de genes inflamatórios em cultura de macrófagos e inflamatórios (Tnfα e Il6) e adipogênicos (Glut4, Adpn, Ap2) em cultura de pré-adipócitos. Métodos: Macrófagos RAW 264.7 foram cultivados na presença de veículo (DMSO, 0,001%), rosiglitazona (RSG) (10 -5 M), GQ-16 (10 -5 M) e na presença ou ausência de estímulo inflamatório LPS (100 ng/mL) ou com a inibidor da MEK 1/2 (U0126 10μM). Pré-adipócitos 3T3-L1 foram cultivados até sua confluência. Após 2 dias foram tratados com coquetel indutor da diferenciação adpogênica por mais dois dias, e em seguida, foram tratados com insulina e os diferentes tratamentos por mais 2 dias: veículo (DMSO, 0,001%), RSG (10 -5 M), GQ-16 (10 -5 M) na presença ou ausência de inibidor da MEK 1/2. A expressão relativa do RNA mensageiro dos genes inflamatórios e adipogênicos foi analisada por PCR quantitativa em tempo real (RT-PCRq). A fosforilação da ERK1/2 foi avaliada por ensaio de Western blot. Resultados: Em cultura de pré-adipócitos no início da diferenciação ambos agonistas de PPARγ não alteraram a fosforilação da ERK1/2. Foi possível observar que a RSG apresentou efeito adipogênico maior que o GQ-16, e que pelo menos parte desse efeito se deve a ativação da via da ERK. Quando analisada a expressão relativa do RNAm do gene da interleucina 6 (Il6), ambos os agonistas diminuíram a sua expressão. Em cultura de macrófagos, a fosforilação da ERK1/2 estimulada por LPS foi diminuída pelo tratamentos com os agonistas de PPARγ. O efeito do LPS na expressão relativa do RNAm de genes inflamatórios foi diminuido quando associado ao agonista total do receptor PPARγ no entanto, a associação com agonista parcial não alterou tal efeito. Conclusão: Pode-se sugerir que o efeito adipogênico maior da RSG em relação ao GQ-16 deve-se em parte ao envolvimento da via da ERK. Ainda, ambos agonistas apresentaram efeito anti-inflamatório, embora o agonista total apresentou maior efeito quando comparado ao agonista parcial. Com estes resultados, este projeto contribuiu para a elucidação do mecanismo de ação do GQ-16, um novo modulador seletivo de PPARγ.Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF).Introduction: During the obesity, the adipose tissue produces several inflammatory mediators. Obesity-associated inflammation is characterized by abnormal production of inflammatory mediators, as well as infiltration by macrophages. Obesity increases the incidence of comorbidities as well as diabetes mellitus (DM2). The use of thiazolidinedione drugs (TZDs) in the treatment of DM2 is associated with several adverse effects. Previous studies have shown that GQ-16 presented partial and specific agonist activity at PPARγ, and effects similar to TZDs in the reduction of blood glucose and with less adipogenic effect. Many of the effects of PPAR agonists are explained by gene expression alteration. However, studies have shown that these agonists can mediate rapid effects that involve a series of intracellular events. However, it has not yet been explored whether these non-genomic mechanisms of PPARγ agonism could explain the beneficial effects of the partial agonist of PPARγ GQ-16. Aim: This study sought to analyze the effects of total and partial agonists from PPARγ on the activation of the ERK1/2 pathway and its involvement in the expression of inflammatory genes in macrophage culture and and inflammatory (Tnfα and Il6) and adipogenic (Glut4, Adpn, Ap2) in pre-adipocyte culture. Methods: RAW 264.7 macrophages were cultivated in the presence of a vehicle (DMSO, 0.001%), rosiglitazone (RSG) (10 -5 M), GQ-16 (10 -5 M) and in the presence or absence of LPS inflammatory stimulus (100 ng/mL) or with MEK 1/2 inhibitor (U0126). Pre-adipocytes 3T3-L1 were cultivated until their confluence. After 2 days they were treated with a cocktail that induced differentiation for another 2 days, and then they were treated with insulin and the different treatments for another 2 days: vehicle (DMSO, 0.001%), RSG (10-5 M), GQ-16 (10-5 M) in the presence or absence of a MEK 1/2 inhibitor. The relative expression of the mRNA of inflammatory and adipogenic genes were analyzed by real-time quantitative PCR (RT-PCRq). ERK1/2 phosphorylation was evaluated by a Western blot assay. Results: In pre-adipocyte culture at the beginning of differentiation, both agonists of PPAR did not alter the phosphorylation of ERK1/2. It was possible to observe that the RSG had an adipogenic effect greater than the GQ-16, and that at least part of this effect is due to the activation of the ERK pathway. When the relative expression of the mRNA of the interleukin 6 gene (Il6) was analyzed, both agonists decreased their expression. In macrophage culture, the phosphorylation of ERK1/2 stimulated by LPS was altered by treatments with PPAR agonists. The effect of LPS on the relative expression of the mRNA of inflammatory genes was reduced when associated with the total agonist of the PPAR receptor, however, the association with partial agonist did not alter this effect. Conclusion: It may be suggested that the greater adipogenic effect of GSR in relation to GQ-16 is partly due to the involvement of the ERK pathway. In addition, both agonists had anti-inflammatory effects, although the total agonist had a greater effect when compared to the partial agonist. With these results, this project contributed to the elucidation of the mechanism of action of GQ-16, a new selective modulator of PPARγ.Faculdade de Ciências da Saúde (FS)Programa de Pós-Graduação em Ciências da SaúdeAmato, Angélica AmorimRoyer, Carineannabarrosf@gmail.comFereira, Anna Paula Barros2024-01-28T15:18:06Z2024-01-28T15:18:06Z2024-01-282019-07-11info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfFEREIRA, Anna Paula Barros. Estudo do envolvimento da via ERK1/2 sobre a resposta adipogênica e anti-inflamatória de agonistas de PPARγ em macrófagos e adipócitos. 2019. 85 f., il. Dissertação (Mestrado em Ciências da Saúde) — Universidade de Brasília, Brasília, 2019.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/47548porinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-01-28T15:18:06Zoai:repositorio.unb.br:10482/47548Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-01-28T15:18:06Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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