Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Portela, Layssa Miranda de Oliveira
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: http://repositorio.unb.br/handle/10482/33943
Resumo: Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018.
id UNB_6b95cedcd4597e4f310d0498c9e1c9ed
oai_identifier_str oai:repositorio2.unb.br:10482/33943
network_acronym_str UNB
network_name_str Repositório Institucional da UnB
repository_id_str
spelling Portela, Layssa Miranda de OliveiraBlawid, RosanaNagata, Tatsuya2019-02-01T18:07:07Z2019-02-01T18:07:07Z2019-02-012018-08-09PORTELA, Layssa Miranda de Oliveira. Norovírus humano GII.4-Sydney: caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon. 2018. 87 f., il. Tese (Doutorado em Biologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2018.http://repositorio.unb.br/handle/10482/33943Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018.Norovírus humano (HuNoV) é uma das principais causas de gastroenterite aguda no mundo sendo responsável por mais de 20% de casos. Esta alta incidência concentrou a atenção para as estratégias de prevenção, especialmente no entendimento da epidemiologia molecular dos norovirus (HuNoV) e para a melhor compreensão dos mecanismos de replicação dos norovirus. Por isso, a genética reversa de HuNoV pode ser uma ferramenta útil para elucidar os processos de infecção viral e mecanismo de replicação. Esse estudo propõe a análise de sequenciamento genômico, desenvolvimento do clone infeccioso e replicon, estudar a localização intracelular da Helicase e RdRp viral. Nesse trabalho foi desenvolvido um método rápido de construção de um clone de cDNA infeccioso de HuNoV usando a técnica Gibson Assembly. Dois genomas de dois isolados HuNoV-393 e HuNoV-666 foram clonados em pCR4-Topo e sequenciados. O relacionamento filogenético baseado nos genes da RNA polimerase (RdRP) e capsídeo (VP1) foram comparativamente analisados com as variantes de GII.4. O genoma completo de HuNoV-393 (GII.4 subtipo Sydney) foi clonado no vetor plasmidial pcDNA 3.1 previamente modificado. Para monitorar a replicação viral in vitro, o gene repórter da proteína fluorescente verde (GFP) foi fusionado nas posições entre os genes Helicase e p22 também por Gibson Assembly para construir o replicon pHuNoV-GFP. As células humanas Caco-2 foram transfectadas com o clone infeccioso contendo cDNA genômico completo e replicon com GFP. A detecção de VP1 em células transfectadas mostraram a evidência indireta da replicação de HuNoV. Desta forma, o clone infeccioso e replicon com GFP para o HuNoV GII.4 subtipo Sydney, constitui uma ferramenta valiosa para o estudo de replicação dos norovírus humano. Nesta tese foi iniciado o estudo dos sítios de replicação do HuNoV por meio do estudo dos genes Helicase e RdRp. Nesse trabalho optamos por clonar os genes Helicase e RdRp em ambas posições N e C-terminal do gene reporter GFP, porém não observamos diferenças de expressão significativa entre as construções RdRp-C e RdRp N-terminal, e com Helicase-N foi observado uma baixa expressão. Experimentos adicionais serão necessários para confirmar a localização das proteínas Helicase e RdRp.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).Human norovirus (HuNoV) is one of the main cause of acute gastroenteritis worldwide responsible for at least 20% of all cases. The higher incidence payed attention on prevention strategies, especially in understand the molecular epidemiology of norovirus (HuNoV) and for a betther understanding of norovirus replication mechanisms. Therefore, reverse genetics of HuNoV might be a useful tool to elucidate viral infection processes and replication mechanisms. This study proposes the analysis of genomic sequencing, development of the infectious clone and replicon, to study intracellular location of the viral Helicase and RdRp. In this work developed a rapid method constructing an infectious cDNA clone of HuNoV using Gibson Assembly technique. Two genomes of HuNoV GII.4 (HuNoV-393 and HuNoV-666) were cloned into pCR4-Topo and sequenced. The phylogenetic relationship based RdRp and VP1 genes were comparatively analysed with the GII.4 variant. The complete genome of the HuNoV-393 (GII4 subtype Sydney) was cloned into the previously modified pcDNA 3.1. To monitor viral replication in vitro, the reporter gene of green fluorescent protein (GFP) was fused at position between Helicase and p22 genes also by Gibson Assembly to construct the pHuNoV-GFP replicon. Human Caco-2 cells were transfected with the full-length genomic clone and replicon with GFP. A detection of VP1 in transfected cells showed the indirect evidence of HuNoV replication. So, the infectious clone and replicon with GFP of HuNoV GII.4 subtype Sydney, is a valuable tools for study in human norovirus replication. In this thesis the study of HuNoV replication sites was started studying the Helicase and RdRp genes. In this work we cloned the Helicase and RdRp genes in both N and C-terminal position of the reporter gene GFP, but we didn´t observe significant differences between the RdRp-C and RdRp N-terminal constructs, and the Helicase-N was observed at low expression level. Additional experiments will be need to confirm the location of Helicase and RdRp proteins.A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições:Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessNorovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e repliconinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisNorovírus humanoVírus - aspectos genéticosPatologia molecularGastroenteriteporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2018_LayssaMirandadeOliveiraPortela.pdf2018_LayssaMirandadeOliveiraPortela.pdfapplication/pdf9339421http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/33943/1/2018_LayssaMirandadeOliveiraPortela.pdfcf529b360482bda92fa5a3e06fe75d1aMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain676http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/33943/2/license.txt59c0495af143a2dbef8cb1eca992b8cfMD52open access10482/339432023-07-07 21:01:00.404open accessoai:repositorio2.unb.br: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Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2023-07-08T00:01Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
title Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
spellingShingle Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
Portela, Layssa Miranda de Oliveira
Norovírus humano
Vírus - aspectos genéticos
Patologia molecular
Gastroenterite
title_short Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
title_full Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
title_fullStr Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
title_full_unstemmed Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
title_sort Norovírus humano GII.4-Sydney : caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon
author Portela, Layssa Miranda de Oliveira
author_facet Portela, Layssa Miranda de Oliveira
author_role author
dc.contributor.advisorco.none.fl_str_mv Blawid, Rosana
dc.contributor.author.fl_str_mv Portela, Layssa Miranda de Oliveira
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Nagata, Tatsuya
contributor_str_mv Nagata, Tatsuya
dc.subject.keyword.pt_BR.fl_str_mv Norovírus humano
Vírus - aspectos genéticos
Patologia molecular
Gastroenterite
topic Norovírus humano
Vírus - aspectos genéticos
Patologia molecular
Gastroenterite
description Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Departamento de Biologia Celular, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2018.
publishDate 2018
dc.date.submitted.none.fl_str_mv 2018-08-09
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2019-02-01T18:07:07Z
dc.date.available.fl_str_mv 2019-02-01T18:07:07Z
dc.date.issued.fl_str_mv 2019-02-01
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.citation.fl_str_mv PORTELA, Layssa Miranda de Oliveira. Norovírus humano GII.4-Sydney: caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon. 2018. 87 f., il. Tese (Doutorado em Biologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2018.
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://repositorio.unb.br/handle/10482/33943
identifier_str_mv PORTELA, Layssa Miranda de Oliveira. Norovírus humano GII.4-Sydney: caracterização molecular e desenvolvimento de clone infeccioso e replicon. 2018. 87 f., il. Tese (Doutorado em Biologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2018.
url http://repositorio.unb.br/handle/10482/33943
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UnB
instname:Universidade de Brasília (UnB)
instacron:UNB
instname_str Universidade de Brasília (UnB)
instacron_str UNB
institution UNB
reponame_str Repositório Institucional da UnB
collection Repositório Institucional da UnB
bitstream.url.fl_str_mv http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/33943/1/2018_LayssaMirandadeOliveiraPortela.pdf
http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/33943/2/license.txt
bitstream.checksum.fl_str_mv cf529b360482bda92fa5a3e06fe75d1a
59c0495af143a2dbef8cb1eca992b8cf
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1797405250979627008

Registros relacionados