Estudo funcional da prolil oligopeptidase de Trypanosoma cruzi e Leishmania infantum : nocaute gênico, inibição enzimática e processos infectivos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Camila Lasse
Data de Publicação: 2018
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/41659
Resumo: Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018.
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Este trabalho teve como objetivo analisar o envolvimento da POP na patogenia de duas doenças: a doença de Chagas e a Leishmaniose visceral. A prolil oligopeptidase de T. cruzi (POPTc80) foi analisada por meio de nocaute físico do gene POPTC80 com a deleção do alelo Non-esmeraldo like pela integração do cassete contendo o gene NEO, que confere resistência a geneticina (G418), sendo observado diferenças de expressão da proteína tanto entre os diferentes clones quanto comparado a cultura selvagem. O clone B2 apresentou uma divisão celular a cada 47 h e o clone C6 a cada 52h, e a imuno marcação mostrou uma redução na intensidade do sinal de fluorescência. O nocaute do alelo Esmeraldo-like para realizar o duplo nocaute, foi com reparo por homologia direta (RHD) e inserção do cassete que confere resistência a marca de seleção higromicina. O duplo nocaute (poptc80-/-) foi confirmado pela amplificação do gene higromicina fosfotransferase e corroborado pela imunofluorescência (IF) com ausência de marcação da POPTc80 nos parasitos. A POP de L. infantum (POPLi) foi avaliada quanto a sua capacidade infectiva em macrófagos murinos sob presença de inibidores específicos da POP, S 17092 e Z-Pro-Prolinal, indicando 50% de redução da taxa de infecção, o que também foi observado quando os parasitos foram incubados com a proteína recombinante e o anticorpo. A POPLi foi observada expressa na fração de membrana e citoplasmática do parasito e este resultado foi corroborado pelo ensaio de IF. A análise funcional da POP de T. cruzi e L. infantum, nos permite avançar na busca por novos alvos quimioterápicos para o tratamento de ambas as doenças tropicais negligenciadas.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).Prolyl oligopeptidase (POP) is a serine protease that cleaves peptides of up to 30 amino acids, but its ability to hydrolyze collagen, fibronectin and extracellular matrix components has already been observed. It participates in important biological processes and is involved in several neurological and inflammatory diseases. Recent studies have pointed to POP of Trypanosoma cruzi (POPTc80) as an important target against Chagas' disease through the development of a vaccine against the protein. This work aimed to analyze the involvement of POP in the pathogenesis of two diseases: Chagas disease and visceral leishmaniasis. The T. cruzi prolyl oligopeptidase (POPTc80) was analyzed by physical knockout of the POPTC80 gene with the deletion of the Non-Esmerald allele allele by the integration of the NEO gene-containing cassette that confers resistance to geneticin (G418), with differences expression of the protein both among the different clones and compared to the wild type. Clone B2 showed a cell division every 47 h and clone C6 every 52 h, and immunoblotting showed a reduction in fluorescence signal intensity. The knockout of the Esmeraldo-like allele to perform the double knockout was with direct homology repair (RHD) and insertion of the cassette that confers resistance to the hygromycin selection marker. The double knockout (poptc80 - / -) was confirmed by amplification of the hygromycin phosphotransferase gene and corroborated by immunofluorescence (IF) with no labeling of POPTc80 in the parasites. The POP of L. infantum (POPLi) was evaluated for its infective capacity in murine macrophages in the presence of specific inhibitors of POP, S 17092 and Z-Pro-Prolinal, indicating a 50% reduction in infection rate, which was also observed when the parasites were incubated with the recombinant protein and the antibody. POPLi was observed expressed in the membrane and cytoplasmic fraction of the parasite and this result was corroborated by the IF assay. The functional analysis of the POP of T. cruzi and L. infantum allows us to advance in the search for new chemotherapeutic targets for the treatment of both neglected tropical diseases.Charneau, Izabela Marques Dourado BastosSilva, Camila Lasse2021-08-13T12:50:18Z2021-08-13T12:50:18Z2021-08-132018-10-30info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdfSILVA, Camila Lasse. Estudo funcional da prolil oligopeptidase de Trypanosoma cruzi e Leishmania infantum: nocaute gênico, inibição enzimática e processos infectivos. 2018. 124 f., il. Tese (Doutorado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2018.https://repositorio.unb.br/handle/10482/41659A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-07T19:43:59Zoai:repositorio.unb.br:10482/41659Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-07T19:43:59Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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