DNA livre de célula no plasma seminal de touros Nelore : possível marcador para qualidade e congelabilidade do sêmen
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| Data de Publicação: | 2022 |
| Tipo de documento: | Dissertação |
| Idioma: | por |
| Título da fonte: | Repositório Institucional da UnB |
| Texto Completo: | http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49092 |
Resumo: | Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2022. |
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DNA livre de célula no plasma seminal de touros Nelore : possível marcador para qualidade e congelabilidade do sêmenCriopreservação de órgãos, tecidos, etc.Touro - reproduçãoSêmen - animaisFertilização animal in vitroDissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2022.A criopreservação de sêmen é uma técnica amplamente utilizada na produção animal. Apesar de bem estabelecida em algumas espécies, a resposta à criopreservação e a capacidade do sêmen criopreservado de produzir embriões in vitro varia de indivíduo para indivíduo. Assim, buscando a identificação de um marcador que possa indicar a congelabilidade e fertilidade in vitro de uma amostra, antes do congelamento, este estudo avaliou a quantidade de DNA livre de células e o número de cópias de cfmtDNA no plasma seminal de touros Nelore. O sêmen de nove touros foi coletado por eletroejaculação, metade do ejaculado foi utilizado para avaliação do sêmen fresco e obtenção do plasma seminal para quantificação de cfDNA, a outra metade foi criopreservada. A avaliação de movimento espermático pelo CASA (IVOS 12.3/Hamilton-Thorne, EUA) e da integridade e estabilidade da membrana plasmática, integridade acrossomal, apoptose e potencial mitocondrial, por citometria de fluxo (AMNIS FlowSight - Amnis Corp., EUA) foram realizados no sêmen fresco e sêmen congelado às 0, 3, 6 e 12h após o descongelamento. O sêmen criopreservado também foi utilizado para a produção de embriões in vitro. A quantificação de cfDNA foi realizada no plasma seminal por espectrofotometria e o número relativo de cópias do cfmtDNA foi quantificado por qPCR. A concentração de cfDNA presente no plasma seminal variou de 15,23 ng/µL à 519,71 ng/µL. A mediana foi calculada (58,95 ng/µL) e dois grupos foram definidos de acordo com a concentração de cfDNA: Baixo-cfDNA (<58,95 ng/µL; n=5) e Alto-cfDNA (>58,95 ng/µL; n=4). O número de cópias de cfmtDNA foi semelhante (P>0,05) entre os grupos. No sêmen fresco, a porcentagem de células com estabilidade de membrana foi maior (P<0,05) no grupo Baixo-cfDNA (84,24%±7,07) comparado ao grupo AltocfDNA (52,72%±7,9) e, ao longo de 12 horas pós- descongelamento, não houve diferenças para todos os parâmetros avaliados entre os grupos. A taxa de clivagem e de blastocistos em D7 foi maior para o grupo Alto-cfDNA (60,74% ± 3,38 e 24,95% ± 2,56, respectivamente), do que para o grupo Baixo-cfDNA (41,21% ± 3,23 e 6,42% ± 1,14). O grupo Alto-cfDNA também produziu embriões com maior número de células. O número relativo de cópias de cfmtDNA variou entre 0,97 cópias a 24,38 cópias e, semelhante ao realizado com os dados de cfDNA, os touros foram divididos em dois grupos (Baixo-cfmtDNA e Alto-cfmtDNA), a partir da mediana (5,35 cópias). A porcentagem de espermatozoides em necrose foi maior (p<0,05) no grupo AltocfmtDNA do que o Baixo-cfmtDNA, tanto no sêmen fresco (40,6% ± 6,4 vs 17% ± 5,8 p=0,03), quanto no criopreservado (31,5±4,1 vs 19,7%±3,6 p=0,04). No sêmen fresco, VAP (109 μm/s ± 3,87) e VSL (91,5 μm/s ± 4,8) foram maiores no grupo BaixocfmtDNA). Para a porcentagem de espermatozoides em necrose foi detectada uma interação entre grupo e tempo (P<0,01), sendo que a porcentagem de espermatozoides em necrose que era superior no grupo Alto-cfmtDNA as 0 horas foi diminuindo ao longo do tempo, enquanto no grupo Baixo-cfmtDNA foi aumentado. Já a quantidade e qualidade de embriões produzidos foi semelhante para ambos os grupos. A concentração de cfDNA e o número relativo de cópias de cfmtDNA no plasma seminal não são capazes de predizer a congelabilidade do sêmen, mas animais com maior quantidade de cfDNA são capazes de produzir in vitro mais embriões e de melhor qualidade.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Embrapa Recursos Genéticos e Biotecnologia.Sperm cryopreservation is a widely used technique in animal production. Although it is well established in some species, the response to cryopreservation and the ability of cryopreserved semen to produce embryos varies depending on individual. Thus,trying to identify a marker that can indicate the freezeability and in vitro fertility of a sample, prior to freezing, the present study evaluated the amount of cell-free DNA and cfmtDNA copy number in the seminal plasma of Nellore bulls. Semen from nine bulls was collected by electroejaculation, half of the ejaculate was used to fresh semen evaluation and to obtain seminal plasma for cfDNA quantification, the other half was cryopreserved. Evaluation of sperm movement by CASA (IVOS 12.3/Hamilton -Thorne, USA) and of plasma membrane integrity and stability, acrosomal integrity, apoptosis, and mitochondrial potential by flow cytometry (AMNIS FlowSight - Amnis Corp., USA) were performed on fresh semen and frozen/thawed semen at 0, 3, 6 and 12h after thawing. Cryopreserved semen was also used for in vitro embryo production. Quantification of cfDNA was performed by spectrophotometry and the cfmtDNA copy number was quantified by qPCR. The concentration of cfDNA present in seminal plasma ranged from 15.23 ng/µL to 519.71 ng/µL. The median was calculated (58.95) and two groups were defined according to cfDNA concentration: Low-cfDNA (<58.95 ng/µL; n=5) and High-cfDNA (>58.95 ng/µL; n=4). The cfmtDNA copy number was similar (P>0.05) between groups. In fresh semen, the percentage of cells with membrane stability was higher (P<0.05) in the Low-cfDNA group (84.24% ±7.07) compared to the High-cfDNA group (52.72%±7,9) and, over 12 hours post-thawing, there were no differences for all parameters evaluated between groups. Cleavage and D7 blastocyst rates were higher for the High-cfDNAgroup (60.74% ± 3.38 and 24.95% ± 2.56, respectively) than for the Low-cfDNAgroup (41.21% ± 3.23 and 6.42% ± 1.14). The High-cfDNA group also produced embryos with high number of cells. The relative cfmtDNA copy number ranged from 0.97 copies to 24.38 copies and, similar to the cfDNA data, the bulls were divided into two groups (Low-cfmtDNAand High-cfmtDNA), from the median (5.35 copies). The percentage of necrotic spermatozoa was higher in the High-cfmtDNA group in both fresh and thawed semen (40.6% ± 6.4 vs 17% ± 5.8 p=0.03, in fresh semen), (31.5 ±4.1 vs 19.7%±3.6 p=0.04, in thawed semen). In fresh semen, VAP (109 µm/s ± 3.87) and VSL (91.5 µm/s ± 4.8) were higher in the LowcfmtDNAgroup. For the percentage of sperm in necrosis, an interaction between group and time was detected (P<0.01), being the percentage of sperm in necrosis that was higher in the Alto-cfmtDNA group at 0 hours decreased over time, while in the LowcfmtDNA group increased. Conversely, the embryo production and quality were similar for both groups. The concentration of cfDNA and the relative number of copies of cfmtDNA in seminal plasma are not able to predict the freezeability of semen, but animals with a greater amount of cfDNA are able to produce more embryos of better quality in vitro.Instituto de Ciências Biológicas (IB)Programa de Pós-Graduação em Biologia AnimalDode, Margot Alves NunesCapobianco, Natalia Ernandes2024-07-22T14:53:09Z2024-07-22T14:53:09Z2024-07-222022-08-31info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfCAPOBIANCO, Natalia Ernandes. DNA livre de célula no plasma seminal de touros Nelore: possível marcador para qualidade e congelabilidade do sêmen. 2022. 92 f., il. Dissertação (Mestrado em Biologia Animal) — Universidade de Brasília, Brasília, 2022.http://repositorio2.unb.br/jspui/handle/10482/49092porA concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2024-07-22T14:53:09Zoai:repositorio.unb.br:10482/49092Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2024-07-22T14:53:09Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false |
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