Escalonamento de produção da proteína rhPDGF-BB em células HEK293T : adaptação e crescimento celular

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cavalcante, Rosana Santos
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/35951
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Química, Programa de Pós-Graduação em Tecnologias Química e Biológica, 2019.
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O tratamento com os fármacos disponíveis no mercado contendo PDGF-BB possuem altos custos, que impossibilita sua disponibilidade aos pacientes e até mesmo sua redistribuição pelo SUS. Neste trabalho, o intuito foi avaliar e acompanhar o crescimento celular de HEK293T superprodutoras de rhPDGF-BB adaptando-as ao crescimento em suspensão aderido à superfícies em microcarreadores em dois aumentos de escala: sistema FibraStage e frasco tipo spinner de 100mL visando o escalonamento da produção da proteína. A avaliação do perfil metabólico dos meios condicionados foi realizado por colorimetria e HPLC. Obteve-se um perfil não linear durante as horas de cultivo em ambos aumentos de escala. Os resultados mostraram que o perfil metabólico das células no FibraStage variou conforme a concentração de glicose no meio e regulou a produção de lactato e glutamina durante a batelada. Para o ensaio em spinner após 5 dias de adaptação celular ao sistema e fase lag de 10 dias, as células atingiram a fase exponencial. Os testes realizados com os microcarreadores mostraram que a medida que as horas de cultivo aumentaram, a integridade física dos carreadores foi comprometida, porém não impediu a proliferação das células em sua superfície. Assim, os resultados mostraram-se promissores para a utilização em um novo aumento de escala e volume de trabalho compatível com biorreator tipo Wave.PDGF-BB is the homodimeric form of the factor derived from platelets, it is a protein responsible for the cascade of blood coagulation, with high mitogenic and angiogenic power. This protein can be used in capillary growth and tissue repair therapies because of its ability to attract, recruit and proliferate different cell types necessary for the process of remodeling the protein matrix. Among the possible applications is the treatment of diabetic neuropathy, a complication of diabetes, which consists of the formation of wounds or ulcers in the peripheral regions - feet - of the patient and that can generate non-traumatic amputations. Treatment with the commercially available drugs containing PDGF-BB has high costs, which makes it impossible for the patients to be available and even for their redistribution through SUS. In this work, the aim was to evaluate and monitor the cell growth of rhPDGF-BB overproducing HEK293Ts adapting them to the growth in suspension adhered to the surfaces in microcarriers in two increases of scale: FibraStage system and spinner bottle aiming at the scale-up of protein production. The evaluation of the metabolic profile of conditioned media was performed by colorimetry and HPLC. A non-linear profile was obtained during the culture hours at both scale increases. The results showed that the metabolic profile of the cells in the FibraStage varied according to the concentration of glucose in the medium and regulated the production of lactate and glutamine during the batch. For the spinner assay after 5 days of cell adaptation to the system and 10 day lag phase, the cells reached the exponential phase. Tests performed with the microcarriers showed that as the growing hours increased, the physical integrity of the carriers was compromised, but did not prevent proliferation of the cells on their surface. Thus, the results were promising for use in a new increase in scale and work volume compatible with Wave type bioreactor.Carmo, Talita SouzaCavalcante, Rosana Santos2019-12-11T20:19:29Z2019-12-11T20:19:29Z2019-12-112019-05-30info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfCAVALCANTE, Rosana Santos. Escalonamento de produção da proteína rhPDGF-BB em células HEK293T: adaptação e crescimento celular. 2019. xi, 50 f., il. Dissertação (Mestrado em Tecnologias Química e Biológica)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.https://repositorio.unb.br/handle/10482/35951A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-17T20:20:26Zoai:repositorio.unb.br:10482/35951Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-17T20:20:26Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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