Expressão heteróloga de fragmentos de anticorpos em Saccharomyces boulardii para tratamento da colite experimental

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Azevêdo, Mariana Gabriela Dantas de
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/41610
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2021.
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spelling Azevêdo, Mariana Gabriela Dantas deBrígido, Marcelo de Macedoazevedomgd@gmail.comMaranhão, Andréa Queiroz2021-08-10T16:35:15Z2021-08-10T16:35:15Z2021-08-102021-04-27AZEVÊDO, Mariana Gabriela Dantas de. Expressão heteróloga de fragmentos de anticorpos em Saccharomyces boulardii para tratamento da colite experimental. 2021. 80 f., il. Dissertação (Mestrado em Patologia Molecular)—Universidade de Brasília, Brasília, 2021.https://repositorio.unb.br/handle/10482/41610Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2021.Doenças Inflamatórias Intestinais são um grupo de desordens inflamatórias crônicas que envolve a Doença de Crohn e a Colite Ulcerativa. A Colite Ulcerativa é uma inflamação recorrente da mucosa que se inicia no reto e pode se estender até o cólon. Atualmente anticorpos neutralizantes de TNF aplicados por via intravenosa são os melhores medicamentos disponíveis para induzir e manter a remissão nos pacientes, mas o custo dessas terapias é muito alto além de gerar efeitos colaterais. Saccharomyces boulardii é uma levedura probiótica utilizada em medicamentos comerciais para tratamento de doenças intestinais, estudos sugerem o potencial de probióticos serem adaptados para a síntese e entrega de terapias orais. Assim a S. boulardii pode ser usada como veículo de entrega de anticorpos neutralizantes ao trato gastrointestinal, restringindo a resposta ao local da inflamação, para tratamento de diferentes doenças como a Colite Ulcerativa. Determinou-se a curva de crescimento desta levedura, bem como o grau de sensibilidade ao antibiótico G418 (50 μg/mL). Em experimentos com camundongos foi possível ainda estabelecer que o tempo de permanência desta levedura no trato digestório de camundongos quando administrada por gavagem era de 48 horas. Dois vetores foram construídos possibilitando a expressão de dois fragmentos scFv de anticorpos (anti-TNF e anti- CD3) na levedura. O protocolo de transformação da levedura foi otimizado e leveduras recombinantes obtidas. As condições de cultivo visando a maior eficiência de expressão dos genes foram estudadas, tendo sido estabelecida: 30oC, 200 rpm, em meio definido YNB tamponado (pH 5,5) por 72 horas. A expressão do scFv anti-TNF foi monitorada no sobrenadante de cultura, sendo este o primeiro relato de expressão heteróloga de um anticorpo pela S. boulardii. Já o scFv anti-CD3 foi expresso fusionado à proteína de parede SED1, sendo este o primeiro relato de apresentação de um fragmento de anticorpo na parede celular dessa levedura. Quando a S. boulardii produtora do scFv anti-TNF foi administrada oralmente em camundongos com colite induzida por Dextrana Sulfato de Sódio houve uma melhora do índice de atividade da doença quando comparado ao grupo doente sem tratamento, o que indica o efeito da neutralização do TNF para diminuição da inflamação.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).Inflammatory Bowel Diseases are a group of chronic inflammatory disorders that involve Crohn's Disease and Ulcerative Colitis. Ulcerative Colitis is a recurrent inflammation of the mucosa that begins in the rectum and can extend to the colon, the best available drugs to induce and maintain remission in patients are intravenously administered antibodies that neutralize TNF, but the costs of these therapies are very high in addition to generating side effects. Saccharomyces boulardii is a probiotic yeast used in commercial medicines for the treatment of intestinal diseases, studies suggest the potential of probiotics to be adapted for the synthesis and delivery of oral therapies. Thus, S. boulardii can be used as a vehicle for the delivery of neutralizing antibodies to the gastrointestinal tract, restricting the response to the inflammation site, for the treatment of different diseases such as Ulcerative Colitis. The growth curve of this yeast was determined, as well as the sensitivity to the antibiotic G418 (50 μg/mL). In experiments with mice, it was established that the time of permanence of this yeast in the digestive tract of mice when administered by oral gavage was 48 hours. Two vectors were constructed allowing the expression of two scFv fragments (anti-TNF and anti-CD3) by the yeast. Yeast transformation protocol has been optimized and recombinant yeasts were obtained. The best cultivation conditions for gene expression were studied, and established as: 30oC, 200 rpm, in the defined medium YNB with buffer (pH 5.5). The expression of the scFv anti-TNF was monitored in the culture supernatant, which was the first report of a heterologous expression of an antibody by S. boulardii. Anti-CD3 scFv, on the other hand, was expressed fused to the SED1 wall protein, this being the first report of an antibody fragment presentation on the cell wall. When the S. boulardii producing the scFv anti-TNF was administered orally to mice with colitis induced by Dextran Sodium Sulfate, the disease activity index improved when compared to the untreated sick group, which indicates the effect of TNF neutralization for decreasing inflammation.A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessExpressão heteróloga de fragmentos de anticorpos em Saccharomyces boulardii para tratamento da colite experimentalinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisSaccharomyces boulardiiscFvAnti-TNFAnticorpos neutralizantesColite ulcerativaporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNBORIGINAL2021_MarianaGabrielaDantasdeAzevedo.pdf2021_MarianaGabrielaDantasdeAzevedo.pdfapplication/pdf17743574http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/41610/1/2021_MarianaGabrielaDantasdeAzevedo.pdf53a48b7895f82568da0a03d2ef0f913cMD51open accessLICENSElicense.txtlicense.txttext/plain671http://repositorio2.unb.br/jspui/bitstream/10482/41610/2/license.txtbacfee268cc5d4f6aaa2e6e0066d38f5MD52open access10482/416102024-01-23 18:13:21.646open accessoai:repositorio2.unb.br:10482/41610QSBjb25jZXNzw6NvIGRhIGxpY2Vuw6dhIGRlc3RlIGl0ZW0gcmVmZXJlLXNlIGFvIHRlcm1vIGRlIGF1dG9yaXphw6fDo28gaW1wcmVzc28gYXNzaW5hZG8gDQpwZWxvIGF1dG9yIGNvbSBhcyBzZWd1aW50ZXMgY29uZGnDp8O1ZXM6DQoNCk5hIHF1YWxpZGFkZSBkZSB0aXR1bGFyIGRvcyBkaXJlaXRvcyBkZSBhdXRvciBkYSBwdWJsaWNhw6fDo28sIGF1dG9yaXpvIGEgVW5pdmVyc2lkYWRlIGRlIEJyYXPDrWxpYQ0KIGUgbyBJQklDVCBhIGRpc3BvbmliaWxpemFyIHBvciBtZWlvIGRvcyBzaXRlcyB3d3cuYmNlLnVuYi5iciwgd3d3LmliaWN0LmJyLA0KIGh0dHA6Ly9oZXJjdWxlcy52dGxzLmNvbS9jZ2ktYmluL25kbHRkL2NoYW1lbGVvbj9sbmc9cHQmc2tpbj1uZGx0ZCBzZW0gcmVzc2FyY2ltZW50byBkb3MgDQpkaXJlaXRvcyBhdXRvcmFpcywgZGUgYWNvcmRvIGNvbSBhIExlaSBuwrogOTYxMC85OCwgbyB0ZXh0byBpbnRlZ3JhbCBkYSBvYnJhIGRpc3BvbmliaWxpemFkYSwNCiBjb25mb3JtZSBwZXJtaXNzw7VlcyBhc3NpbmFsYWRhcywgcGFyYSBmaW5zIGRlIGxlaXR1cmEsIGltcHJlc3PDo28gZS9vdSBkb3dubG9hZCwgYSB0w610dWxvIGRlIA0KZGl2dWxnYcOnw6NvIGRhIHByb2R1w6fDo28gY2llbnTDrWZpY2EgYnJhc2lsZWlyYSwgYSBwYXJ0aXIgZGVzdGEgZGF0YS4=Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestopendoar:2024-01-23T21:13:21Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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