Detecção molecular de vírus gastroentéricos em amostras de fezes conservadas em formol

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Fábio Gonçalves da
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UnB
Texto Completo: https://repositorio.unb.br/handle/10482/36117
Resumo: Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2019.
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spelling Detecção molecular de vírus gastroentéricos em amostras de fezes conservadas em formolGastroenteriteVírus gastroentéricosFormalinaÁcidos nucleicos - extraçãoDissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2019.A gastroenterite aguda é uma manifestação clínica que causa diarreia, vômitos, náusea e, em casos mais severos, desidratação que pode levar, principalmente crianças e idosos, ao óbito. Estimativas apontam que um bilhão e setecentos mil casos de gastroenterite ocorram anualmente em todo o mundo, tal manifestação gera grande prejuízo econômico, seja por dispêndios médicos ou pelo impacto social que gera ao debilitar trabalhadores em idade produtiva. Dentre os agentes causadores dessa moléstia estão os vírus gastroentéricos, especialmente os pertencentes às famílias Astroviridae, Caliciviridae, Reoviridae e Adenoviridae. Para a detecção de vírus gastroentéricos as amostras ideais seriam fezes frescas, diarreicas e sem conservante. Na prática clínica, a obtenção destas amostras representa um percentual muito menor se comparado com as amostras contendo conservantes à base de formol. A formalina é um importante interferente para a utilização de técnicas de detecção molecular, sendo capaz de reduzir a eficiência de pareamento de oligonucleotídeos, fragmentar moléculas de DNA e RNA, dificultar a precipitação de ácidos nucleicos durante o processo de extração e diminuir a capacidade catalítica da Taq Polimerase. O primeiro passo para a utilização de técnicas moleculares é a extração do material genético, desse modo, a comparação de diferentes métodos de extração para recuperar ácidos nucleicos virais em amostras de fezes acondicionadas com formalina pode apresentar uma alternativa diagnóstica para vírus de RNA e DNA. Para tal, três metodologias de extração foram comparadas para a detecção de quatro vírus gastroentéricos que são importantes causadores de quadros de gastroenterite utilizando a técnica de PCR. Foi possível demonstrar que a adição de RNA-Carrier durante a extração das amostras aumentou a quantidade de material genético recuperado; a concentração de DNA utilizado como template para o PCR é um fator importante para uma amplificação bem-sucedida a depender da técnica utilizada; e dentre as metodologias testadas, uma se mostrou mais eficaz, tem custo mais baixo e pode ser uma importante ferramenta para a utilização de amostras biológicas que tendem a ser descartadas em inquéritos epidemiológicos devido a sua não conformidade pela adição de formol. A não investigação dessas amostras impacta em resultados subestimados de incidência e prevalências desses agentes virais.Acute gastroenteritis is a clinical manifestation that causes diarrhea, vomiting, nausea and in more severe cases dehydration that can lead, mainly, children and elderly people to death. Estimates indicate that 1.7 billion cases of gastroenteritis occur annually around the world, this manifestation generates great economic damage, either by medical expenses or by the social impact that it generates by debilitating workers on productive age. Among the agents that cause this disease are the viruses, especially those belonging to the families Astroviridae, Caliciviridae, Reoviridae and Adenoviridae. For the detection of gastroenteric viruses the ideal samples would be fresh, diarrheal and unpreserved feces. In clinical practice, these kinds of samples represent a much lower percentage when compared to samples containing preservatives based on formaldehyde. Formalin is an important interferant for the use of molecular detection techniques, being able to reduce the efficiency of oligonucleotide pairing, to fragment DNA and RNA molecules, to hinder the precipitation of nucleic acids during the extraction process and to decrease the catalytic capacity of the Taq Polymerase. The first step in the use of molecular techniques is the extraction of the genetic material, so comparing different extraction methods to recover viral nucleic acids in formalin-conditioned feces samples may provide a diagnostic alternative for RNA and DNA viruses. To do this, three extraction methodologies were compared for the detection of four gastroenteric viruses that are important causative agents of gastroenteritis using the PCR technique. It was possible to demonstrate that the addition of RNA-Carrier during the extraction of samples increased the amount of genetic material recovered; the concentration of DNA used as template for PCR is an important factor for a successful amplification depending on the technique used; and among the methodologies tested, one has been shown to be more effective, has a lower cost and may be an important tool for the use of biological samples that tend to be discarded in epidemiological surveys due to their non-compliance by the addition of formaldehyde. Non-investigation of these samples impacts on underestimated results of incidence and prevalence of these viral agents.Haddad, RodrigoLamounier, Alves da CostaSilva, Fábio Gonçalves da2020-01-16T14:48:45Z2020-01-16T14:48:45Z2020-01-162019-07-12info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdfSILVA, Fábio Gonçalves da. Detecção molecular de vírus gastroentéricos em amostras de fezes conservadas em formol. 2019. 74 f., il. Dissertação (Mestrado em Medicina Tropical)—Universidade de Brasília, Brasília, 2019.https://repositorio.unb.br/handle/10482/36117A concessão da licença deste item refere-se ao termo de autorização impresso assinado pelo autor com as seguintes condições: Na qualidade de titular dos direitos de autor da publicação, autorizo a Universidade de Brasília e o IBICT a disponibilizar por meio dos sites www.bce.unb.br, www.ibict.br, http://hercules.vtls.com/cgi-bin/ndltd/chameleon?lng=pt&skin=ndltd sem ressarcimento dos direitos autorais, de acordo com a Lei nº 9610/98, o texto integral da obra disponibilizada, conforme permissões assinaladas, para fins de leitura, impressão e/ou download, a título de divulgação da produção científica brasileira, a partir desta data.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UnBinstname:Universidade de Brasília (UnB)instacron:UNB2023-07-13T14:52:18Zoai:repositorio.unb.br:10482/36117Repositório InstitucionalPUBhttps://repositorio.unb.br/oai/requestrepositorio@unb.bropendoar:2023-07-13T14:52:18Repositório Institucional da UnB - Universidade de Brasília (UnB)false
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