Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Oliveira, Ila Maria de Aguiar
Data de Publicação: 1997
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1584386
Resumo: Orientador: Yong Kun Park
id UNICAMP-30_05e9867948541126af6e34ef411662a2
oai_identifier_str oai::114338
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideosAçucar - Análise e testesFrutoseSacaroseOrientador: Yong Kun ParkTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de AlimetnosResumo: Frutooligossacarídeos são açúcares produzidos a partir da sacarose pela ação da ß-frutofuranosidase (E.C. 3.2.1.26) e consistem, principalmente, de 1-kestose (GF2), nistose (GF3) e frutofuranosil nistose (GF4) em que uma a três unidades de frutosila são unidas através de ligações glicosídicas ß-2,1 a unidades de frutose da sacarose, respectivamente. Os frutooligossacarídeos produzidos pela ação de enzimas microbianas têm-se destacado devido a seus efeitos fisiológicos específicos em seres humanos e suas excelentes vantagens funcionais em alimentos. O objetivo deste trabalho foi isolar uma linhagem microbiana que possua ß-frutofuranosidase com alta atividade, para produzir frutooligossacarídeos e estudar as características bioquímicas dessa enzima. Foram isoladas 1752 linhagens de microrganismos, provenientes de pólen de flores, mel, solo, folhas e caule de vegetais coletados em diversas regiões do Brasil. Essas linhagens eram, principalmente, leveduras osmofílicas produtoras de enzimas que transformam a sacarose em outros açúcares, de interesse industrial. Dentre os 1752 microrganismos isolados, 52 linhagens apresentaram ß-frutofuranosidase com atividade de transferência, convertendo sacarose a frutooligossacarídeos: 1-kestose, nistose e frutofuranosilnistose, mas, somente 8 produziram ß-frutofuranosidase extracelular e intracelularmente, destacando-se a linhagem de Aureobasidium sp. 771-1 que produziu altos teores de ß-frutofuranosidase extracelular, com atividade de transferência de grupos frutosila, sendo, portanto, selecionada para ser estudada, nesse experimento, quanto as suas características enzimáticas. A ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp 771-1 foi puriticada 29;5 vezes (12% de rendimento), em relação à enzima bruta e mostrou atividade específica de 266 unidades/mg de proteína. A enzima apresentou pH e temperatura ótima de 5,5 e 55°C, respectivamente, mostrando-se estável na faixa de pH 4,5 a 6,0 em temperaturas inferiores a 55°C, sendo inibida pelos íons Hg+ e I2 e, também, pelos reagentes bromosuccinimida e ß-hidroximercuribenzoato, nas concentrações de 1 e 10 mM, após 30 minutos de incubação a 55°C. Quanto aos parâmetros cinéticos de Km e Vmax, a ß-frutofuranosidase apresentou os valores de 0,36 M e 6,3 µmol/ml/min., respectivamente, para o substrato sacarose. Seu peso molecular foi estimado em 200.000 daltons, através de filtração em gel Sephadex G-200. A ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp 771-1 converteu 61% da sacarose (50% p/v) para frutooligossacarídeos, sendo obtidos 38% de l-kestose, 20% de nistose e 3% de frutofuranosil nistoseAbstract: Fructooligosaccharides are produced from sucrose by the action of ß-fructofuranosidase (EC 3.2.1.26) and consist mainly of 1-kestose, nistose and fructofuranosil nistose, in which one, two or three fructosyl units are bound at the 13-2,1 position of sucrose, respectively. Fructooligosaccharides from sucrose have become important because of their specific physiological effects on humans and their excellent functional advantages in food. The objective of this work was to isolate a strain of microorganisms which produced high ß-fructofuranosidase activity for the production fructooligosaccharides and to study the characteristics of the enzyme. One thousand seven hundred and fifty two strains of microorganism were isolated from pollens, honey, soil, leaves, flowers and stalks of plants from several regions in Brazil. They were mainly osmophilic yeasts producing enzymes which transformed sucrose to other sugars that have attracted industrial interest. Among these 1752 strains, 52 strains showed high activity of ß-fructofuranosidase which converted sucrose to fructooligosaccharides such as 1-kestose, nystose and fructofuranosyl nystose, but only 8 produced both extra and intracellular ß-fructofuranosidase. The strain of Aureobasidium sp 771-1 was found to produce the most extracellular ß-fructofuranosidase with greater activity of fructosyl transfer for fructooligosaccharide production. This enzyme was selected to be purified and characterized. The extracellular ß-fructofuranosidase was purified about 29.5-fold (12% yield) with respect to the crude enzyme preparation with a specific activity of 266 units/mg protein. It was found that the optimum pH and temperature for activity were 5.5 and 55°C, respectively. The enzyme was stable from pH 4.6 to 6.0 and at temperatures below 55°C. The activity of the enzyme was inhibited by Hg+ and 12. The enzyme was also inactivated by N-bromosuccinimide and ß-hydroxymercuribenzoate at 1 mM and 10 mM, after 30 minutes at 55°C. The Km and Vmax values of ß-fructofuranosidase for sucrose were 0.36 M and 6.3 µmol/ml/min., respectively. The molecular weight of the enzyme was determined to be 200.000 daltons by Sephadex G-200 gel filtration. The ß-fructofuranosidase from Aureobasidium sp 771-1 formed 61% of fructooligosaccharides, which consisted of 38% 1-kestose, 20% nystose and 3% fructofuranosyl nystose, when 50% sucrose was used as substrate.DoutoradoDoutor em Ciência de Alimentos[s.n.]Park, Yong Kun, 1930-2018Okka, Carlos HosamuBon, ElbaMenezes, Hilary Castle deAlegre, Ranulfo MonteSato, Helia HarumiPastore, Glaucia MariaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Engenharia de AlimentosPrograma de Pós-Graduação em Ciência de AlimentosUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASOliveira, Ila Maria de Aguiar19971997-04-28T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf124 f. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1584386OLIVEIRA, Ila Maria de Aguiar. Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos. 1997. 124 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimetnos, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1584386. Acesso em: 2 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/114338porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T02:33:33Zoai::114338Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T02:33:33Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
title Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
spellingShingle Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
Oliveira, Ila Maria de Aguiar
Açucar - Análise e testes
Frutose
Sacarose
title_short Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
title_full Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
title_fullStr Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
title_full_unstemmed Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
title_sort Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos
author Oliveira, Ila Maria de Aguiar
author_facet Oliveira, Ila Maria de Aguiar
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Park, Yong Kun, 1930-2018
Okka, Carlos Hosamu
Bon, Elba
Menezes, Hilary Castle de
Alegre, Ranulfo Monte
Sato, Helia Harumi
Pastore, Glaucia Maria
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Engenharia de Alimentos
Programa de Pós-Graduação em Ciência de Alimentos
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Oliveira, Ila Maria de Aguiar
dc.subject.por.fl_str_mv Açucar - Análise e testes
Frutose
Sacarose
topic Açucar - Análise e testes
Frutose
Sacarose
description Orientador: Yong Kun Park
publishDate 1997
dc.date.none.fl_str_mv 1997
1997-04-28T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1584386
OLIVEIRA, Ila Maria de Aguiar. Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos. 1997. 124 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimetnos, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1584386. Acesso em: 2 set. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1584386
identifier_str_mv OLIVEIRA, Ila Maria de Aguiar. Produção e caracterização da ß-frutofuranosidase de Aureobasidium sp e sua aplicação na produção de frutos ligossacarideos. 1997. 124 f. Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimetnos, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1584386. Acesso em: 2 set. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/114338
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
124 f. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1809188794171129856

Registros relacionados