Desenvolvimento de nova metodologia para dosagem de cisteina em amostras biologicas atraves de espectrometria de massas - T&R-MIMS

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Vellasco, Adriana Paula
Data de Publicação: 2002
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1594194
Resumo: Orientadores: Nelci Fenalti Hoehr, Marcos N. Eberlin
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spelling Desenvolvimento de nova metodologia para dosagem de cisteina em amostras biologicas atraves de espectrometria de massas - T&R-MIMSSistema cardiovascular - DoençasAminoácidos - MetabolismoAgentes oxidantesEspectrometria de massaOrientadores: Nelci Fenalti Hoehr, Marcos N. EberlinDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: Dentre os aminotiois encontrados no plasma a cisteína, homocisteína e a glutationa constituem um sistema de defesa antioxidante extracelular. Em concentrações elevadas a homocisteína exerce ação oxidante, o que induz a formação de espécies reativas de oxigênio (ERO) sendo que a cisteína participa da autoxidação da homocisteína. Aumento dos níveis de cisteína pode ser um fator de risco cardiovascular bem como de lesões ateroscleróticas, indicando sua associação independente à doenças cardiovasculares. Contudo a associação de altos níveis de cisteína, homocisteína e LDL colesterol podem agir sinergicamente. Níveis alterados de cisteína também estão relacionados a inúmeras condições patológicas como mutações gênicas, doenças neurodegenerativas tais como as doenças de Alzheimer, Parkinson e Neuromotoras; AIDS e câncer. Assim, o desenvolvimento de novas metodologias com a finalidade de quantificar cisteína em sangue ou urina são úteis no diagnóstico de diversas doenças. O objetivo deste trabalho foi o desenvolvimento de um método moderno e viável para quantificação de cisteína sérica. Para isso empregamos uma nova técnica: espectrometria de massas por introdução via membrana (MIMS), utilizando-se uma sonda de membrana DIMP (Direct Introduction Mass Spectrometry) operando no método T&R-MIMS (Trap and Release Membrane Introduction Mass Spectrometry). Analisando os espectros de massas obtidos durante as análises, a escolha do íon para o monitoramento da quantificação de cisterna foi o de m/z 220 que corresponde ao fragmento molecular por perda de um hidrogênio formando o íon '[M -H] POT +'. O íon de m/z 220 é o de maior intensidade (pico base) e presente em uma região do espectro menos suscetível a interferentes. Seu monitoramento por T&R-MIMS operando no modo SIM (monitoramento seletivo de íons) permite determinar a concentração de cisteína. Os resultados obtidos se mostraram satisfatórios: linearidade (r=0,998), repetibilidade com um desvio de 3% entre três medidas realizadas; limite de detecção de 2'mu'M e recuperação acima de 95%. Foram também realizados ensaios com amostras sanguíneas de quarenta doadores voluntários onde a concentração total de Cis em soro ficou entre 87 e 266 'mu' M/L com uma média '+ ou -' de 143, '+ ou -' 52,2 'mu'M/LAbstract: The amino acid cysteine (Cys) and homocysteine (Hcy) takes part of a group of biological aminothiols in blood and others physiological fluids. These three thiols are involved in cellular homeostasis however altered levels of Cys and Hcy have been implicated in cardiovascular risk factor, and in a number of pathological conditions. A Mass Spectrometry method (DIMP/T&R-MIMS) for determination of cysteine (tCys) and homocysteine (tHcy) concentration directly from human blood after derivatization with ethyl chloroformate based on analyte preconcentration in a capillary silicone membrane and thermal desorbed to the gas phase using the heat radiation from the ionization filament using a new strategy for a trap & release and removable direct introduction membrane probe (DIMP), resulting in an technique with good sensitivity and stability. Cysteine and homocysteine determination was carried sample pumped continuously through the probe of the T&R-MIMS system for quantitation, during fifteen minutes (trapping step). After that occurs thermal desorption step needed for SVOC analysis in contact with the membrane, the volatile compounds permeates the membrane, and is ionized by electron impact (EI) and analyzed in the mass spectrometer. The method uses no chromatographic separation, is linear, reproducible, and displays limit of quantitation (2 'mu¿M) sufficiently below the threshold concentration of tCys and tHcy in plasma. Recovery experiments showed recoveries of 95% by Cys and 97% by Hcy. It also combines chemical, membrane, and mass spectrometric discrimination, and can be used to determine selected amino acids in human plasma simultaneously. After derivatization with ethyl chloroformate, many amino acids in aqueous solution are observed to be efficiently detected; hence T&R-MIMS is promising as a simple and sensitive technique for simultaneous quantitation of selected amino acids in plasma and urine, and in other aqueous matrices. Blood samples was analyzed by direct SIM monitoring and results showed with DIMP/T&R-MIMS potentiality in complex matricesMestradoCiências BiomédicasMestre em Ciências Médicas[s.n.]Höehr, Nelci Fenalti, 1947-2018Eberlin, Marcos Nogueira, 1959-Garlipp, Celia ReginaOliveira Neto, Graciliano deGrotto, Helena Zerlotti WolfUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Ciências MédicasUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASVellasco, Adriana Paula20022002-07-24T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf179p. : il.(Broch.)https://hdl.handle.net/20.500.12733/1594194VELLASCO, Adriana Paula. Desenvolvimento de nova metodologia para dosagem de cisteina em amostras biologicas atraves de espectrometria de massas - T&R-MIMS. 2002. 179p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. 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