Estudo da expressão de ferroportina nas hemocromatoses hereditárias por citometria de fluxo
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2019 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) |
Texto Completo: | https://hdl.handle.net/20.500.12733/1638088 |
Resumo: | Orientador: Kleber Yotsumoto Fertrin |
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Estudo da expressão de ferroportina nas hemocromatoses hereditárias por citometria de fluxoStudy of ferroportin expression in hereditary hemochromatosis by flow cytometryFerroportinaHemocromatoseCitometria de fluxoSobrecarga de ferroFerroportinHemochromatosisFlow cytometryIron overloadOrientador: Kleber Yotsumoto FertrinDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências MédicasResumo: O metabolismo do ferro é regulado pela interação do hormônio hepcidina e seu receptor ferroportina (Fpn), a única proteína exportadora de ferro de mamíferos. Pacientes com Hemocromatoses Hereditárias (HH) são caracterizados por apresentarem sobrecarga de ferro e deficiência de hepcidina e normalmente toleram sangrias terapêuticas sem desenvolver anemia. Considerando que a deficiência de hepcidina causa superexpressão de Fpn, nosso objetivo foi caracterizar a expressão de Fpn no sangue periférico de controles saudáveis e pacientes com fenótipo HH. Amostras de sangue periférico venoso foram analisadas por citometria de fluxo utilizando um anticorpo anti-Fpn humana não conjugado, seguido por um anticorpo fluorescente secundário e co-incubado com anti-CD45, CD33, CD3, CD19 e HLA-DR fluorescentes para identificar os tipos de células presentes na amostra. As amostras foram analisadas em um citômetro de fluxo FACS Canto II. Recrutamos 31 pacientes com fenótipo HH e sobrecarga de ferro (SF) - sete homozigotos HFE C282Y, três heterozigotos duplos HFE C282Y / H63D, quatro homozigotos HFE H63D e o restante com suspeita de HH baseada em estudos de ferro e/ou tolerância a mais que 10 sangrias, aguardando teste para outras mutações, e 15 controles saudáveis (CS). A ferritina mediana foi de 163 ng/mL (faixa 34 - 1430) no grupo SF e 110 ng/mL (faixa 34 - 333) no CS. A saturação média de transferrina (TSAT) foi de 29 ± 6% no CS e de 45 ± 13% no SF. A expressão de Fpn foi maior na população de monócitos (CD45+ CD33+ HLA-DR+) e de linfócitos B (CD45hi CD19+ HLA-DR+). As intensidades médias de fluorescência (IMF) absolutas de Fpn, bem como a relação de IMF de Fpn de monócitos / linfócitos T (IMFr) não diferiram significativamente entre os grupos CS e SF em nenhuma das linhagens de células, mas uma análise de subgrupo revelou que pacientes SF com TSAT> 50% tinham um IMFr de Fpn significativamente maior que o CS. Descobrimos que a IMF absoluta e a IMFr de Fpn não foram significativamente maiores em SF com HFE mutado, provavelmente devido ao pequeno número de pacientes. Nossos dados sugerem que a expressão de Fpn em monócitos de sangue periférico pode variar com a TSAT. Estudos prospectivos em pacientes com HH confirmados durante o tratamento são necessários para determinar se a expressão de Fpn no sangue periférico pode ser útil para diagnóstico e monitoramento terapêuticoAbstract: Iron metabolism is regulated by the interaction of the hormone hepcidin and its receptor ferroportin (Fpn), the only mammalian iron exporting protein. Patients with hereditary hemochromatoses (HH) are characterized by iron overload and hepcidin deficiency and typically tolerate phlebotomies without developing anemia. Considering that hepcidin deficiency causes Fpn overexpression, we aimed to characterize Fpn expression in peripheral blood of healthy controls and patients with a HH phenotype. Peripheral blood was analyzed by flow cytometry using an unconjugated anti-human Fpn antibody, followed by a secondary fluorescent antibody, and co-incubated with fluorescent anti-CD45, CD33, CD3, CD19, and HLA-DR to identify cell types. Samples were analyzed on a FACS Canto device. We recruited 31 patients with a HH phenotype and iron overload (IO) - seven HFE C282Y homozygotes, three HFE C282Y/H63D double heterozygotes, four HFE H63D homozygotes, and the remainder with suspected HH based on iron studies, tolerance to >10 phlebotomies, awaiting test for other mutations, and 15 healthy controls (HC). Median ferritin was 163 ng/mL (range 34 - 1430) in the IO group and 110 ng/mL (range 34 - 333) in HC. Mean transferrin saturation (TSAT) was 29 ± 6% in HC and 45 ± 13% in IO. Fpn expression was higher in monocytes (CD45+ CD64+ HLA-DR+) and B-cells (CD45hi CD19+ HLA-DR+). Absolute Fpn mean fluorescence intensities (MFI) as well as monocyte/T-cell Fpn MFI ratio (MFIr) did not differ significantly between HC and IO groups in any of the cell types, but a subgroup analysis revealed that IO patients with a TSAT>50% had a significantly higher Fpn MFIr than HC. We found Fpn absolute MIF and MFIr were not significantly higher in IO with mutated HFE, probably due to the small number of patients. Our data suggest that Fpn expression in peripheral monocytes may vary with TSAT. Prospective studies in confirmed HH patients during treatment are warranted to determine whether Fpn expression in peripheral blood may be useful for diagnosis and therapeutic monitoringMestradoPatologia ClínicaMestra em CiênciasFAPESP2014/00984-3CNPQ[s.n.]Fertrin, Kleber Yotsumoto, 1980-Delamain, Marcia TorresanFigueiredo, Maria StellaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Ciências MédicasPrograma de Pós-Graduação em Ciências MédicasUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASCampioni, Marina Dal'Bó Pelegrini, 1990-20192019-11-22T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (74 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1638088CAMPIONI, Marina Dal'Bó Pelegrini. Estudo da expressão de ferroportina nas hemocromatoses hereditárias por citometria de fluxo. 2019. 1 recurso online (74 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1638088. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1126266Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2020-03-02T11:10:29Zoai::1126266Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2020-03-02T11:10:29Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false |
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