Avaliação do efeito da cisplatina associada com 5-Aza-2CdR no perfil de metilação do DNA e expressão do gene MGMT em células de CEC oral

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lima, Dieila Giomo de, 1992-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1636225
Resumo: Orientador: Ana Paula de Souza
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spelling Avaliação do efeito da cisplatina associada com 5-Aza-2CdR no perfil de metilação do DNA e expressão do gene MGMT em células de CEC oralEffect of cisplatin treatment associated with 5-Aza-2CdR on the DNA methylation and MGMT gene expression profile in OSCCMetilação de DNACisplatinoCarcinoma de células escamosasDNA methylationCisplatinCarcinoma, squamous cellOrientador: Ana Paula de SouzaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: O perfil de metilação e expressão do gene O6-metilguanina-DNA metiltransferase (MGMT) têm sido estudados em vários tipos de tumor, incluindo tumores sólidos de cabeça e pescoço. Embora esse gene seja considerado um supressor tumoral devido ao seu papel como gene de reparo do DNA, o interesse por ele também se deve a sua relação com a resistência ao tratamento com quimioterápicos como, por exemplo, a cisplatina (CDDP). Em carcinoma de células escamosas ou carcinoma espinocelular (CEC), porém, pouco se sabe sobre o papel desse gene frente a terapias que utilizam a cisplatina conjugada a outras drogas, como 5-aza-2CdR. Assim, o presente estudo propôs investigar os efeitos do tratamento com cisplatina conjugada ou não com 5-aza-2CdR na viabilidade celular, no perfil de metilação do DNA e na expressão do gene MGMT em células de CEC de língua. Para isso, 3 linhagens de CEC de língua (SCC-9, SCC-15 e SCC-25) foram submetidas aos tratamentos por 72 horas contendo: CDDP 0.1 µM, 5-aza-2CdR (0,1 ou 0,3 µM), CDDP 0.1 µM + 5-aza-2CdR 0.1 ou 0.3 µM. Ao final dos tratamentos foram avaliados a viabilidade celular pelo ensaio de MTT, o perfil de metilação do DNA na região promotora do gene MGMT, pela técnica de comparação de melting (MS-HRM), e a expressão relativa do gene MGMT pela técnica de RT-qPCR. Os resultados mostram que todos os tratamentos reduziram a viabilidade celular das linhagens SCC-15 e SCC-25, enquanto que a SCC-9 apresentou redução da viabilidade somente no grupo 5-Aza-2CdR (0,3 µM) isolado ou conjugado com CDDP 0.1 µM. Foi observado que o gene MGMT possui perfis de metilação e expressão diferentes entre as linhagens estudadas, sendo que a região analisada se apresentou 100% desmetilada nas células SCC-15 e SCC-25 e, portanto, com alta expressão gênica, e parcialmente (50%) metilada na SCC-9, portanto com menor expressão gênica. O tratamento com 5-aza-2CdR, associado ou não à cisplatina, em ambas as concentrações testadas foi capaz de reduzir a metilação e aumentar a expressão do gene MGMT nas células da linhagem SCC-9, sendo que o tratamento conjugado com CDDP 0.1 µM + 5-aza-2CdR 0.3 µM apresentou o aumento mais significativo de expressão. Já a linhagem SCC-25 apresentou redução da expressão do gene MGMT em todos os grupos tratados com 5-aza-2CdR. Os dados apresentados contribuem para uma investigação promissora desse gene na sua relação com a aquisição da resistência à cisplatinaAbstract: The methylation profile and expression of the O6-methylguanine-DNA methyltransferase (MGMT) gene have been studied in several tumor types, including solid tumors of the head and neck. MGMT represents a tumor suppressor gene in reason of its ability to repair DNA molecule. However, MGMT has been also correlated to chemotherapy treatment resistance, such as cisplatin (CDDP). The literature about squamous cell carcinoma (SCC) treatment with combining drugs is poor, e.g., there are not outcomes from using cisplatin associated to 5-aza-2CdR. Thus, the present study proposed to investigate the effects of treatment with cisplatin conjugated or not with 5-aza-2CdR on cell viability, DNA methylation profile and MGMT gene expression in SCC cells of the tongue. SCC-9, SCC-15 and SCC-25 linage cells were submitted to 72-hour treatments containing: 0.1 µM CDDP, 5-aza-2CdR (0.1 or 0.3 µM), 0.1 µM CDDP + 5-aza-2CdR 0.1 or 0.3 µM. After that, were evaluated the cell viability by the MTT assay, the methylation profile of DNA in the promoter region of the MGMT gene by the melting comparison technique (MS-HRM), and the relative expression of the MGMT gene by qRT-PCR analysis. The results showed that all treatments reduced the cell viability of the SCC-15 and SCC-25 lines, whereas SCC-9 showed reduction of viability only in the 5-aza-2CdR (0.3 µM) group isolated or conjugated to 0.1 µM CDDP. It was observed that the MGMT gene has different methylation and expression profiles among the studied linages. The analyzed region was 100% demethylated in the SCC-15 and SCC-25 cells, which presented high gene expression, and partially (50 %) methylated in SCC-9, and therefore, with lower gene expression. Treatment with 5-aza-2CdR, isolated or conjugated, at both concentrations tested, was able to reduce the methylation and increase the MGMT gene expression in the SCC-9 line, and the treatment with CDDP 0.1 µM + 5-aza-2CdR 0.3 µM showed a more significant increase in expression. In contrast, the SCC-25 line presented reduced expression of the MGMT gene in all groups treated with 5-aza-2CdR. The data presented contribute to a promising investigation of this gene in its relation with the acquisition of resistance to cisplatinMestradoHistologia e EmbriologiaMestra em Biologia Buco-DentalCNPQ131798/2017-0[s.n.]de Souza, Ana Paula, 1975-Trevilatto, Paula CristinaLine, Sergio Roberto PeresUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Odontologia de PiracicabaPrograma de Pós-Graduação em Biologia Buco-DentalUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASLima, Dieila Giomo de, 1992-20192019-03-29T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (64 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1636225LIMA, Dieila Giomo de. Avaliação do efeito da cisplatina associada com 5-Aza-2CdR no perfil de metilação do DNA e expressão do gene MGMT em células de CEC oral. 2019. 1 recurso online (64 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Piracicaba, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1636225. Acesso em: 15 mai. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1088782Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2019-06-07T14:40:15Zoai::1088782Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2019-06-07T14:40:15Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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