Efeito do tratamento com 5-aza-CdR na expressão do gene "CCNG2" em células do carcinoma de células escamosas oral

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Costa, Vitor Marinho da, 1996-
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/15852
Resumo: Orientador: Ana Paula de Souza
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spelling Efeito do tratamento com 5-aza-CdR na expressão do gene "CCNG2" em células do carcinoma de células escamosas oralEffect of 5-aza-CdR treatment on "CCNG2" gene expression in oral squamous cell carcinoma cellsMetilação de DNACarcinoma de células escamosas oralDNA methylationOral squamous cell carcinomaOrientador: Ana Paula de SouzaDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de PiracicabaResumo: Esse trabalho teve como objetivo investigar o efeito do tratamento com a droga desmetilante 5-aza-CdR (Decitabina) na concentração de 1µM na expressão dos genes CCNG2, IGFBP3, cMYC e na atividade das metaloproteinases-2 e -9 (MMP-2 e MMP-9). Para isso as linhagens células de carcinoma de células escamosas (SCC9, SCC15 e SCC25) foram tratadas com 1µM de 5-aza-CdR, seguido de ensaio de MTT (construção de curva de crescimento), zimografia (para análise de atividade das MMP-2 e MMP-9) e RT- q PCR para análise de expressão gênica. A análise de RT-qPCR revelou que não houve uma diferença significativa na expressão do gene CCNG2 nas células SCC-9 e SCC-15 após o tratamento com 1µM de 5-aza-CdR (p>0,05). No entanto, as células SCC-25 tratadas com 1µM de 5-aza-CdR mostraram um aumento significativo na expressão do gene CCNG2 (p=0,03). Quanto ao gene IGFBP3, houve um aumento significativo da expressão nas células SCC-9 e SCC-15 após o tratamento com 1µM de 5-aza-CdR (p=0,04), mas uma diminuição da expressão em células SCC-25 tratadas com 1µM de 5-aza-CdR (p=0,03). O gene cMYC manteve sua expressão praticamente inalterada nas células SCC-9, aumentou sua expressão nas células SCC-15 após o tratamento e diminuiu sua expressão nas células SCC-25 (p=0,04). O gel de zimografia evidenciou uma diminuição na atividade das MMP-2 e MMP-9 nos grupos tratados das linhagens SCC-15 e SCC-25. Embora o tratamento com a droga desmetilante 5-aza-CdR tenha modificado a expressão dos genes analisados, não é possível concluir se houve um efeito direto ou indireto do tratamento com a droga uma vez que 5-aza-CdR age de maneira global no genoma e não desmetilando genes específicos. No entanto, os resultados observados nas células SCC-25 mostraram que o aumento da expressão de CCNG2 pode se dar devido à desmetilação promovida pelo 5-aza-CdR uma vez que hipermetilação do gene é observada em amostras tumorais de câncer de cabeça e pescoço. Assim, análise de metilação pós-tratamento é um ensaio indispensável para esclarecer essa questão. Ainda, o aumento da expressão de CCNG2 nas células SCC-25 foi acompanhado de uma diminuição da expressão de IGFBP3, cMYC, MMP-2 e MMP-9. Esses resultados corroboram com outros resultados presentes na literatura como o de Wang e colaboradores de 2021 onde um mecanismo relacionando a função de CCNG2 e os demais genes é descrito e merece ser investigado com mais ensaios, como gene knockdown e superexpressão de CCNG2Abstract: This study aimed to investigate the effect of treatment with the demethylating drug 5-aza-CdR (Decitabine) at a concentration of 1µM on the expression of the genes CCNG2, IGFBP3, cMYC, and the activity of matrix metalloproteinases-2 and -9 (MMP-2 and MMP-9). For this purpose, squamous cell carcinoma cell lines (SCC9, SCC15, and SCC25) were treated with 1µM of 5-aza-CdR, followed by MTT assay (growth curve construction), zymography (for analysis of MMP-2 and MMP-9 activity), and RT-qPCR for gene expression analysis. The RT-qPCR analysis revealed that there was no significant difference in the expression of the CCNG2 gene in SCC-9 and SCC-15 cells after treatment with 1µM of 5-aza-CdR (p>0.05). However, SCC-25 cells treated with 1µM of 5-aza-CdR showed a significant increase in CCNG2 gene expression (p=0.03). Regarding the IGFBP3 gene, there was a significant increase in expression in SCC-9 and SCC-15 cells after treatment with 1µM of 5-aza-CdR (p=0.04), but a decrease in expression in SCC-25 cells treated with 1µM of 5-aza-CdR (p=0.03). The cMYC gene maintained its expression virtually unchanged in SCC-9 cells, increased its expression in SCC-15 cells after treatment, and decreased its expression in SCC-25 cells (p=0.04). Zymography gel showed a decrease in the activity of MMP-2 and MMP-9 in the treated groups of SCC-15 and SCC-25 cell lines. Although treatment with the demethylating drug 5-aza-CdR modified the expression of the analyzed genes, it is not possible to conclude whether there was a direct or indirect effect of the drug treatment since 5-aza-CdR acts globally on the genome, not demethylating specific genes. However, the results observed in SCC-25 cells suggest that the increase in CCNG2 expression may be due to demethylation promoted by 5-aza-CdR, as hypermethylation of the gene is observed in tumor samples of head and neck cancer. Therefore, post-treatment methylation analysis is an essential assay to clarify this issue. Furthermore, the increase in CCNG2 expression in SCC-25 cells was accompanied by a decrease in the expression of IGFBP3, cMYC, MMP-2, and MMP-9. These results support other findings in the literature, such as Wang et al.'s 2021 study, where a mechanism linking the function of CCNG2 and other genes is described and deserves further investigation through assays such as gene knockdown and CCNG2 overexpressionAbertoMestradoHistologia e EmbriologiaMestre em Biologia Buco-DentalCAPES88887.63954/2021-00[s.n.]de Souza, Ana Paula, 1975-Oliveira, Naila Francis Paulo deBastos, Débora CampanellaUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Faculdade de Odontologia de Piracicaba (FOP)Programa de Pós-Graduação em Biologia Buco-DentalUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASCosta, Vitor Marinho da, 1996-20232023-11-08T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf1 recurso online (51 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/15852COSTA, Vitor Marinho da. Efeito do tratamento com 5-aza-CdR na expressão do gene "CCNG2" em células do carcinoma de células escamosas oral. 2023. 1 recurso online (51 p.) Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba, Piracicaba, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/15852. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/1376021Requisitos do sistema: Software para leitura de arquivo em PDFporreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2024-03-08T03:52:31Zoai::1376021Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2024-03-08T03:52:31Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
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