Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Cunha Júnior, José Luiz Rosenberis
Data de Publicação: 2010
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1612089
Resumo: Orientadores: Maricilda Palandi de Mello, Celso Eduardo Benedetti, Fernanda Caroline Soardi
id UNICAMP-30_b43b21bcac232637ec5f7e5dd95a014e
oai_identifier_str oai::768629
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XYSRY gene mutation analysis and functional effects in cases of XY gonadal dysgenesisDisgenesia gonadalGenes sryDiferenciação do sexoMutação (Biologia)Análise funcionalgonadal dysgenesisSRY genesSex differentiationMutation (Biology)Functional analysisOrientadores: Maricilda Palandi de Mello, Celso Eduardo Benedetti, Fernanda Caroline SoardiDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de BiologiaResumo: A expressão do gene SRY (Sex Determining Region in chromosome Y) é responsável por desencadear a determinação testicular durante o desenvolvimento embrionário, a partir das gônadas ainda indiferenciadas. Mutações nesse gene são encontradas em muitos casos de anomalias do desenvolvimento gonadal. O projeto teve por objetivo principal a análise funcional do efeito de uma mutação na região promotora do gene SRY, sendo que essa mutação consiste em uma deleção de 3 pares de base em um dos sítios consenso de ligação do fator de transcrição Sp1 ao promotor do gene. O portador dessa mutação é um indivíduo com disgenesia gonadal pura 46,XY, sendo que outros membros da família apresentavam ambiguidade genital e o pai, também portador da mutação, possuía grave hipospadia ao nascimento. Para tentar esclarecer os efeitos desta mutação nos mecanismos moleculares de regulação da expressão do gene SRY, este trabalho primeiramente analisou a interação da proteína Sp1 com os sítios localizados na região promotora de SRY e o efeito da mutação nesta interação, através de ensaios de EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay). Concluiu-se que os sítios Sp1A e Sp1B se ligam a duas moléculas de Sp1 e que a mutação no Sp1A praticamente abole esta ligação. Possivelmente a ausência dessa ligação impediu a formação de um complexo de transcrição, causando uma diminuição na expressão do gene SRY e levando à ausência de formação dos testículos e reversão sexual completa na paciente. Complementando, foi analisado o efeito dessa mutação na expressão através de ensaio de expressão com gene repórter, no qual o promotor normal se mostrou em média duas vezes mais eficiente na ativação da expressão da luciferase que o promotor mutante. Entretanto, mais experimentos de transfecção, inclusive com outras linhagens celulares, devem ser realizados para confirmação desse resultado. Além disso, foi analisado o efeito de uma nova mutação (localizada na região codificante do gene SRY) na ligação da proteína SRY com o DNA, através de ensaios de EMSA. Concluiu-se que a mutação E89K, associada com disgenesia gonadal pura 46,XY, reduziu em alto nível a atividade de ligação in vitro da proteína SRY mutante ao DNA, o que representa um forte indício de que atividade reduzida da proteína mutante não foi suficiente para desencadear o processo de determinação testicular. Paralelamente, foi feito o rastreamento de mutações no gene SRY e sua região promotora em novos casos de disgenesia gonadal, não tendo sido encontradas, porém, alterações nos pacientes analisadosAbstract: The SRY (Sex Determining Region in chromosome Y) gene expression is responsible for testicular determination during embrionary development. Mutations in SRY are found in many cases of anomalies of gonadal development. This project analyzed the functional effect of a mutation in SRY promoter region; the mutation is a 3-bp deletion in a consensus binding site for Sp1 transcription factor. The patient presented 46,XY pure gonadal dysgenesis, and a family history of relatives with different levels of genital ambiguity. Her father shares the same mutation in the SRY promoter region. In order to investigate the effects of the mutation upon the molecular mechanisms that regulate SRY gene expression, the interaction of the Sp1 transcription factor with normal and mutant binding sites was analyzed by EMSA (Electrophoretic Mobility Shift Assay). Each of Sp1A and Sp1B normal sites binds to a single Sp1 molecule, whereas the 3-bp deletion in Sp1A abolishs the binding to this site. Probably, the lack of Sp1 binding to the Sp1A site prevented the formation of a stable transcription complex, reducing the level of SRY expression and leading to the absence of testicles and complete sex reversal in the patient. Parallely, the effect of the mutation was analyzed by a reporter gene assay, indicating that the normal promoter is almost two times more efficient than the mutant promoter in the activation of luciferase gene expression using HeLa cells. However, further transfection experiments with other cell lineages must be performed to confirm this result. In addition, the effect of a new mutation (E89K, located in the SRY gene coding region) was analyzed by testing the ability of the SRY mutant protein to bind its DNA consensus sequence. EMSA assays revealed that the E89K mutation, which is associated with 46,XY pure gonadal dysgenesis, strongtly reduced the SRY protein binding activity in vitro. This result is a strong evidence that the reduced activity of SRY mutant protein was not sufficient to trigger the testicular determination in the patient, leading to the pure gonadal dysgenesis phenotype. Screening of mutations in the SRY gene coding and promoter regions was also performed in six diferent patients with 46,XY gonadal dysgenesis. However, other mutations have not been identifiedMestradoGenética Animal e EvoluçãoMestre em Genética e Biologia Molecular[s.n.]Mello, Maricilda Palandi de, 1954-Benedetti, Celso Eduardo, 1964-Soardi, Fernanda Caroline, 1980-Azzoni, Adriano RodriguesPaulino, Luciana CamposUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Genética e Biologia MolecularUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASCunha Júnior, José Luiz Rosenberis2010info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf136 p. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1612089CUNHA JÚNIOR, José Luiz Rosenberis. Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY. 2010. 136 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1612089. Acesso em: 3 set. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/768629porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T05:52:20Zoai::768629Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T05:52:20Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
SRY gene mutation analysis and functional effects in cases of XY gonadal dysgenesis
title Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
spellingShingle Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
Cunha Júnior, José Luiz Rosenberis
Disgenesia gonadal
Genes sry
Diferenciação do sexo
Mutação (Biologia)
Análise funcional
gonadal dysgenesis
SRY genes
Sex differentiation
Mutation (Biology)
Functional analysis
title_short Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
title_full Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
title_fullStr Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
title_full_unstemmed Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
title_sort Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY
author Cunha Júnior, José Luiz Rosenberis
author_facet Cunha Júnior, José Luiz Rosenberis
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Mello, Maricilda Palandi de, 1954-
Benedetti, Celso Eduardo, 1964-
Soardi, Fernanda Caroline, 1980-
Azzoni, Adriano Rodrigues
Paulino, Luciana Campos
Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia
Programa de Pós-Graduação em Genética e Biologia Molecular
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Cunha Júnior, José Luiz Rosenberis
dc.subject.por.fl_str_mv Disgenesia gonadal
Genes sry
Diferenciação do sexo
Mutação (Biologia)
Análise funcional
gonadal dysgenesis
SRY genes
Sex differentiation
Mutation (Biology)
Functional analysis
topic Disgenesia gonadal
Genes sry
Diferenciação do sexo
Mutação (Biologia)
Análise funcional
gonadal dysgenesis
SRY genes
Sex differentiation
Mutation (Biology)
Functional analysis
description Orientadores: Maricilda Palandi de Mello, Celso Eduardo Benedetti, Fernanda Caroline Soardi
publishDate 2010
dc.date.none.fl_str_mv 2010
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1612089
CUNHA JÚNIOR, José Luiz Rosenberis. Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY. 2010. 136 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1612089. Acesso em: 3 set. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1612089
identifier_str_mv CUNHA JÚNIOR, José Luiz Rosenberis. Analises de mutações e de seus efeitos na expressão do gene SRY em casos de disgenesia gonadal XY. 2010. 136 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1612089. Acesso em: 3 set. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/768629
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
136 p. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1809189030881918976