Parasitos em amostras de água de piscinas e em hortaliças : desafios de detecção por métodos parasitológicos ou moleculares = Parasites in samples of swimming pools waters and vegetables: challenges of detection through parasitological or molecular methods

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Ortiz Pineda, Carolina, 1980-
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1635691
Resumo: Orientadores: Regina Maura Bueno Franco; Diego Averaldo Guiguet Leal
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A capacidade de identificar e confirmar sua presença como agentes causadores de surtos epidêmicos, ainda é limitada, especialmente quando considera-se seu isolamento e detecção em amostras hídricas e alimentares. Diante esse cenário, foram avaliadas amostras (n=57) de águas de piscinas para a detecção de T. gondii, Cryptosporidium spp. e Giardia spp. e amostras de hortaliças para a detecção de ovos de helmintos. Para a detecção dos protozoários patogênicos, foi utilizado o método de filtração em membranas descrito por Franco et al., 2001, introduzindo algumas modificações como pré-filtração (quando foi requerido) e centrifugo-concentração a 1500 x g (15min). A purificação da amostra foi feita por separação imunomagnética (IMS), utilizando dissociação térmica, seguido por o teste de imunofluorescência direta para cistos de Giardia e oocistos de Cryptosporidium, visualizados sob microscópio de epifluorescência. Para a detecção de oocistos de T. gondii, foi feita uma flutuação com sacarose a partir do liquido de descarte da IMS, e esse produto foi filtrado em membrana de 25 mm e visualizada sob luz UV. Pela microscopia, foram detectados Giardia spp. (4/21; 19,0%), Cryptosporidium spp. (2/21; 9,5%) e formas semelhantes aos oocistos de T. gondii (7/21; 33,3%). Nas análises moleculares, Giardia foi confirmada em 3/4 piscinas previamente positivas por IFA, enquanto que nenhuma amplificação de DNA de Cryptosporidium foi obtida. Para as estruturas similares aos oocistos de Toxoplasma gondii, houve amplificação em 3/7 piscinas. A detecção de ovos de helmintos em hortaliças, constou de duas etapas. Na Primeira, foi realizado um estudo inter-laboratorial para avaliar o desempenho da metodologia padronizada e validada por Matosinhos et al., (2016), na recuperação de ovos de Ascaris spp. Amostras de alface e rúcula foram contaminadas artificialmente com ovos de Ascaris suum e foram analisadas pelos diferentes laboratórios. Para alface, a média de recuperação de ovos foi de 57,10 (± DP: 37,6) e de 50,7% (± DP: 29,0) para a rúcula. Na segunda etapa, foi examinada a contaminação natural de alface, rúcula ou coentro por helmintos, em sete cidades de cinco estados brasileiros, utilizando a metodologia de Matosinhos et al., (2016). Para tanto, foram analisados 672 amostras (334 de alface, 249 de rúcula e 89 de coentro). Ovos de helmintos foram detectados em 12,5% de todas as amostras de hortaliças. Os ovos de Ascaris sp. foram os mais encontrados (6,25%), seguido por ovos semelhantes aos de ancilostomátideos (5,05%) e ovos de Trichuris sp. (1,19%). A contaminação com ovos de helmintos foi semelhante entre os diferentes vegetais analisados (qui-quadrado, ?2 = 4.9896, p valor = 0.2884), com níveis de contaminação de 9,8% para a alface, 16,06% para a rúcula e 12,3% para o coentro. A presença de diferentes parasitos contaminando as águas de piscinas (protozoários) e as hortaliças (helmintos) pode aumentar o risco de aquisição de infecções pelos usuários e consumidoresAbstract: Relationships between water- and food-borne parasites and their environment are complex. Fecal contamination is the main axis related to transmission of enteroparasites contaminating the environment, but the capacity to identify and to confirm their presence as causal agents of epidemic outbreaks is still limited, regarding, in particular, its isolation and detection protocols in water and food samples. Considering this background, fifty-seven samples of swimming-pool water were analyzed to detect Toxoplasma gondii, Cryptosporidium spp. and Giardia spp. Samples of some leafy vegetables were also analyzed to detect helminthes eggs. The detection of waterborne protozoa from water samples were performed in accordance with Franco et al, 2001, with minor modifications to detect pathogenic protozoa. Protocol modifications were the performance of sample pre-filtration (if needed) and a step of centrifugation-concentration at 1500 g for 15 minutes. Sample purification was carried out by immunomagnetic separation (IMS) using thermal dissociation. Giardia cysts and Cryptosporidium oocysts identification was made by direct immunofluorescence under the epifluorescence microscope. In order to detect T. gondii oocysts, a sacarose fluctuation protocol for the IMS discarded liquid was performed; this product was filtered through a 25 mm membrane and examined under ultra-violet light. By epifluorescence microscope analysis, all parasitic forms were detected: Giardia spp. (4/21; 19.0%), Cryptosporidium spp. (2/21; 9.5%) and T. gondii oocysts-like (7/21; 33.3%). Molecular tests confirmed Giardia findings in 3 out of 4 IFA positive swimming-pools but Cryptosporidium results were not confirmed by DNA amplification. For Toxoplasma gondii oocysts-like forms, positive autofluorescence results were confirmed by DNA amplification in 3 out of 7 swimming-pools. Analysis of leafy vegetables was divided in two stages. The first one was an inter-laboratorial study to evaluate the performance of the method that was standardized and validated by Matosinhos et al., (2016) for Ascaris spp. eggs recovery. In this stage, lettuce and arugula samples were artificially contaminated with Ascaris suum eggs and these samples were analyzed by several laboratories. Egg¿s recovery means were 57.10 (± SD 37,6) for lettuce and 50.7% (± SD: 29.0) for arugula. On the second stage, natural contamination of lettuce, arugula and cilantro samples by helminthes eggs was tested in seven cities of five Brazilian states, using Matosinhos et al., (2016) method. Overall, 672 samples were evaluated (lettuce: 332, arugula: 249, cilantro: 89) and 12.5% of them tested positive for helminthes eggs. The most frequent finding was Ascaris sp. (6.25%), followed by hookworm-like (5.05%) and Trichuris sp. eggs (1.19%). There was no difference on the contamination levels by helminth eggs among the several types of vegetables (?2 = 4.9896, p = 0.2884); contamination levels were 9.8%, 16.06%, and 12.3% for lettuce, arugula and cilantro, respectively. Swimming-pool water contamination by protozoa or food contaminations by helminthes represent a higher risk of infection for users and consumersDoutoradoRelações Antrópicas, Meio Ambiente e ParasitologiaDoutora em Biologia Animal[s.n.]Franco, Regina Maura Bueno, 1958-Leal, Diego Averaldo Guiguet, 1982-Santos, Luciana Urbano dosCoelho, Adriano CappellazzoRazzolini, Maria Tereza PepeAraujo, Ronalda Silva deUniversidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de BiologiaPrograma de Pós-Graduação em Biologia AnimalUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASOrtiz Pineda, Carolina, 1980-20172017-09-15T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisapplication/pdf1 recurso online (192 p.) : il., digital, arquivo PDF.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1635691ORTIZ PINEDA, Carolina. Parasitos em amostras de água de piscinas e em hortaliças: desafios de detecção por métodos parasitológicos ou moleculares = Parasites in samples of swimming pools waters and vegetables: challenges of detection through parasitological or molecular methods. 2017. 1 recurso online (192 p.) Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1635691. 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