Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Serracchiani, Marcel Mafei, 1986-
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1621546
Resumo: Orientador: Sonia Maria Alves Bueno
id UNICAMP-30_c5d7c0935ca7c2e9e3fd6e43514f5c2d
oai_identifier_str oai::917521
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de sojaIMAC purification strategy of human IgG Fab fragments added to soy protein extractCromatografiaPurificaçãoProteinas de sojaCromatografia de afinidadeProteínas - SeparaçãoChromatographyPurificationSoy proteinAffinity chromatographyProteins separationOrientador: Sonia Maria Alves BuenoDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia QuímicaResumo: A produção de proteínas recombinantes em plantas transgênicas tem se mostrado uma forma segura, eficiente e barata de obtenção em grande escala de várias proteínas de interesse, tais como vacinas, enzimas industriais, bioativos, biofarmacos e anticorpos e seus fragmentos. Contudo, para que a produção de proteínas recombinantes em plantas se torne viável é necessário o desenvolvimento de um processo de recuperação e separação da molécula alvo que seja eficiente e reprodutivo, pois a produção de biomoléculas em plantas transgênicas, assim como os métodos tradicionais de produção, apresentam componentes indesejáveis que devem ser removidos. Neste trabalho, avaliou-se a purificação de fragmentos Fab de IgG humana adicionados artificialmente (spiking) a extrato protéico de soja não transgênica utilizando-se a técnica de cromatografia de afinidade por íons metálicos imobilizados (IMAC). Estudou-se o efeito dos quelatos IDA-Ni(II) e TREN-Ni(II), dos sistemas tamponantes Tris-HCl, fosfato de sódio e Mes, na presença e na ausência de sal (NaCl) na purificação de fragmentos Fab. Primeiramente foram realizados experimentos cromatográficos com as proteínas nativas do extrato proteico do grão de soja. Dos resultados obtidos, selecionou-se, para o adsorvente agarose-TREN-Ni(II), o sistema tamponante Tris-HCl/Tris-HCl na ausência de NaCl, e para o adsorvente agarose-IDA-Ni(II), selecionou-se o sistema tamponante fosfato de sódio/acetato de sódio contendo NaCl. Estes sistemas tamponantes e adsorventes foram utilizados para purificação dos fragmentos Fab adicionados (spiking) ao extrato proteico de grãos de soja. Em agarose-TREN-Ni(II), os fragmentos Fab foram purificados por cromatografia negativa, obtendo-se 66% dos fragmentos Fab na etapa de flowthrough e lavagem, com um grau de pureza de 91% e fator de purificação de 1,4. Para o adsorvente agarose-IDA-Ni(II), os fragmentos Fab foram purificados por cromatografia tradicional (eluição a pH 5,8), obtendo-se alto grau de pureza do fragmento Fab purificados, com um fator de purificação de 2,5. Este estudo contribuiu para obter conhecimento de base para posterior aplicação da técnica de IMAC na purificação de proteínas recombinantes produzidas em sementes de plantas transgênicasAbstract: The recombinant proteins production using transgenic plants have been considered a safe, efficient and cheap way of producing on large scale innumerous proteins of interest, such as vaccines, industrial enzymes, bioactives, biopharmaceuticals and antibody and it fragments. However, for the production of recombinant proteins in plants become viable is necessary to develop a process for recovery and separation of the target molecule that is efficient and reproductive, because the production of biomolecules in transgenic plants, as well as traditional production methods, have components reactions which must be removed. In this work, the purification of Fab fragments of human IgG added artificially (spiking) to extract non-transgenic soy protein, using the technique of affinity chromatography on immobilized metal ions (IMAC), was evaluated. The effect of chelating agents IDA-Ni(II) and TREN-Ni(II), and the buffers Tris, sodium phosphate and Mes, in presence and the absent of NaCl, was studied for the Fab purification. First, the chromatographic experiments with the native proteins of soybean extract were performed. From the results obtained, it was selected, for the adsorbent TREN-Ni(II), the buffers system Tris-HCl/Tris-HCl without NaCl, and for the adsorbent IDA-Ni(II), the buffer system sodium phosphate/ sodium acetate with NaCl was selected. These adsorbents and buffer systems were used for purification of Fab fragments added (spiking) to soybean extract proteins. In the agarose adsorbent TREN-Ni (II), Fab fragments were purified by negative chromatography, obtaining 66% of Fab fragments in flowthrough and wash steps with a purity of 91% and purification factor of 1.4. For the adsorbent agarose-IDA-Ni (II), Fab fragments were purified by traditional chromatography (elution at pH 5.8), obtaining a high purity of the purified FAB, with a purification factor of 2.5. This study contributed to obtain knowledge base for application of the technique on the IMAC purification of recombinant proteins produced in transgenic plant seedsMestradoDesenvolvimento de Processos BiotecnológicosMestre em Engenharia Química[s.n.]Bueno, Sonia Maria Alves, 1961-Tamashiro, Wirla Maria da Silva CunhaMiranda, Everson AlvesUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia QuímicaPrograma de Pós-Graduação em Engenharia QuímicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASSerracchiani, Marcel Mafei, 1986-2013info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf102p. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1621546SERRACCHIANI, Marcel Mafei. Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja. 2013. 102p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1621546. Acesso em: 15 mai. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/917521porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T07:10:12Zoai::917521Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T07:10:12Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
IMAC purification strategy of human IgG Fab fragments added to soy protein extract
title Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
spellingShingle Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
Serracchiani, Marcel Mafei, 1986-
Cromatografia
Purificação
Proteinas de soja
Cromatografia de afinidade
Proteínas - Separação
Chromatography
Purification
Soy protein
Affinity chromatography
Proteins separation
title_short Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
title_full Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
title_fullStr Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
title_full_unstemmed Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
title_sort Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja
author Serracchiani, Marcel Mafei, 1986-
author_facet Serracchiani, Marcel Mafei, 1986-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Bueno, Sonia Maria Alves, 1961-
Tamashiro, Wirla Maria da Silva Cunha
Miranda, Everson Alves
Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia Química
Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Serracchiani, Marcel Mafei, 1986-
dc.subject.por.fl_str_mv Cromatografia
Purificação
Proteinas de soja
Cromatografia de afinidade
Proteínas - Separação
Chromatography
Purification
Soy protein
Affinity chromatography
Proteins separation
topic Cromatografia
Purificação
Proteinas de soja
Cromatografia de afinidade
Proteínas - Separação
Chromatography
Purification
Soy protein
Affinity chromatography
Proteins separation
description Orientador: Sonia Maria Alves Bueno
publishDate 2013
dc.date.none.fl_str_mv 2013
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1621546
SERRACCHIANI, Marcel Mafei. Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja. 2013. 102p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1621546. Acesso em: 15 mai. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1621546
identifier_str_mv SERRACCHIANI, Marcel Mafei. Estratégia de purificação por IMAC de fragmento Fab de IgG humana adicionado a extrato proteico de soja. 2013. 102p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1621546. Acesso em: 15 mai. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/917521
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
102p. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1799138516171489280

Registros relacionados