Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Bonturi, Nemailla, 1985-
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
Texto Completo: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615851
Resumo: Orientadores: Everson Alves Miranda, Adriano Rodrigues Azzoni
id UNICAMP-30_f43ead41e43ec5dfa95612bfaad490f3
oai_identifier_str oai::804340
network_acronym_str UNICAMP-30
network_name_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository_id_str
spelling Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênicaSingle step chromatographic purification of plasmid DNA from neutralised lysate aiming its application in gene therapy and vaccinationCromatografiaPlasmídeosBiomoléculas - PurificaçãoAnálise cromatográficaChromatographyPlasmidsBiomolecules - PurificationChromatographic analysisOrientadores: Everson Alves Miranda, Adriano Rodrigues AzzoniDissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia QuímicaResumo: O número de estudos em terapia gênica com vetores plasmídiais (pDNA) têm aumentado nestes últimos anos. Como resultado, a demanda para preparações de pDNA em conformidade com as recomendações das agências reguladoras (EMEA, FDA) também aumentou. O DNA plasmidial é frequentemente obtido através da fermentação de Escherichia coli transformada e purificada por uma série de operações unitárias, incluindo a cromatografia. Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um processo cromatográfico para a recuperação e purificação do pDNA superenovelado (sc pDNA) a partir do lisado neutralizado. Os ligantes fenil (hidrofóbico) e mercaptopirimidina (tiofílico) foram imobilizados em matrizes de agarose e celulose. A seletividade destes ligantes para com o sc pDNA foi determinada através de estudos de adsorção utilizando citrato de sódio 1,5 mol/L e fosfato de potássio 2,0 mol/L como tampões de adsorção. A cromatografia com o adsorvente fenil-agarose e o citrato de sódio 1,5 mol/L permitiu recuperar 58% do pDNA sem contaminação por gDNA, proteínas e endotoxinas, sendo uma alternativa potencial para a recuperação primária do sc pDNA. O resultado mais promissor foi obtido com a cromatografia com o adsorvente mercaptopirimidina-agarose e fosfato de potássio 2,0 mol/L como tampão de adsorção. Este sistema tampão de adsorção/adsorvente permitiu a obtenção de pDNA com 100% de pureza e dentro das recomendações das agências reguladoras no tocante à contaminação por RNA e endotoxinas. Assim, este trabalho lançou as bases para o desenvolvimento de dois métodos cromatográficos para a recuperação primária ou purificação de pDNA diretamente do lisado neutralizado, ambos potencialmente aplicáveis em larga escalaAbstract: The number of studies in gene therapy with plasmid vectors (pDNA) has witnessed an increase in the recent years. As result the demand for preparations of pDNA in compliance with recommendations of the regulatory agencies (EMEA, FDA) has also increased. Plasmid DNA is oftenly obtained through fermentation of transformed Escherichia coli and purified by a series of unit operations, including chromatography. This work aimed the development of a chromatographic process for the recovery and purification of supercolied pDNA (sc pDNA) directly from neutralized cell lysate. Phenyl (hydrophobic) and mercaptopyrimidine (thiophilic) molecules immobilized in agarose and cellulose matrices were the ligands used to capture the pDNA. Their selectivity towards sc pDNA was evaluated through adsorption studies using sodium citrate 1.5 mol/L and potassium phosphate 2.0 mol/L as the adsorption buffers. The chromatography with the adsorbent phenyl-agarose and sodium citrate 1.5 mol/L was able to recover 58% of sc pDNA without gDNA, proteins and endotoxins contamination, being an potential alternative for the primary recovery of sc pDNA. The most promising result was obtained with the chromatography with mercaptopyrimidine-agarose and potassium phosphate 2.0 mol/L adsorpition buffer. With the latter buffer/adsorbent system it was possible to obtain in a single step pDNA with 100% purity and within the recommendations of regulatory agencies with regard to contamination by RNA and endotoxins. Thus, this work laid the basis for the development of two chromatographic process for the recovery or purification of pDNA directly from the neutralized lysate, both potentially applicable in larger scaleMestradoDesenvolvimento de Processos BiotecnológicosMestre em Engenharia Química[s.n.]Miranda, Everson Alves, 1959-Azzoni, Adriano Rodrigues, 1971-Bueno, Sonia Maria AlvesMaluf, Mirian PerezUniversidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia QuímicaPrograma de Pós-Graduação em Engenharia QuímicaUNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINASBonturi, Nemailla, 1985-20112011-04-07T00:00:00Zinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisapplication/pdf147 p. : il.https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615851BONTURI, Nemailla. Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica. 2011. 147 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615851. Acesso em: 15 mai. 2024.https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/804340porreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)instacron:UNICAMPinfo:eu-repo/semantics/openAccess2017-02-18T06:20:47Zoai::804340Biblioteca Digital de Teses e DissertaçõesPUBhttp://repositorio.unicamp.br/oai/tese/oai.aspsbubd@unicamp.bropendoar:2017-02-18T06:20:47Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)false
dc.title.none.fl_str_mv Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
Single step chromatographic purification of plasmid DNA from neutralised lysate aiming its application in gene therapy and vaccination
title Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
spellingShingle Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
Bonturi, Nemailla, 1985-
Cromatografia
Plasmídeos
Biomoléculas - Purificação
Análise cromatográfica
Chromatography
Plasmids
Biomolecules - Purification
Chromatographic analysis
title_short Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
title_full Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
title_fullStr Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
title_full_unstemmed Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
title_sort Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica
author Bonturi, Nemailla, 1985-
author_facet Bonturi, Nemailla, 1985-
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Miranda, Everson Alves, 1959-
Azzoni, Adriano Rodrigues, 1971-
Bueno, Sonia Maria Alves
Maluf, Mirian Perez
Universidade Estadual de Campinas. Faculdade de Engenharia Química
Programa de Pós-Graduação em Engenharia Química
UNIVERSIDADE ESTADUAL DE CAMPINAS
dc.contributor.author.fl_str_mv Bonturi, Nemailla, 1985-
dc.subject.por.fl_str_mv Cromatografia
Plasmídeos
Biomoléculas - Purificação
Análise cromatográfica
Chromatography
Plasmids
Biomolecules - Purification
Chromatographic analysis
topic Cromatografia
Plasmídeos
Biomoléculas - Purificação
Análise cromatográfica
Chromatography
Plasmids
Biomolecules - Purification
Chromatographic analysis
description Orientadores: Everson Alves Miranda, Adriano Rodrigues Azzoni
publishDate 2011
dc.date.none.fl_str_mv 2011
2011-04-07T00:00:00Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615851
BONTURI, Nemailla. Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica. 2011. 147 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615851. Acesso em: 15 mai. 2024.
url https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615851
identifier_str_mv BONTURI, Nemailla. Purificação em etapa cromatográfica única de DNA plasmidial a partir do lisado neutralizado visando a sua aplicação em estudos de terapia e vacinação gênica. 2011. 147 p. Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Química, Campinas, SP. Disponível em: https://hdl.handle.net/20.500.12733/1615851. Acesso em: 15 mai. 2024.
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv https://repositorio.unicamp.br/acervo/detalhe/804340
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
147 p. : il.
dc.publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
publisher.none.fl_str_mv [s.n.]
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instname:Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron:UNICAMP
instname_str Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
instacron_str UNICAMP
institution UNICAMP
reponame_str Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
collection Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.name.fl_str_mv Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP) - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP)
repository.mail.fl_str_mv sbubd@unicamp.br
_version_ 1799138485937897472

Registros relacionados