MAPEAMENTO IN SILICO DE SÍTIOS INTRÍNSECOS DE CURVATURA NA REGIÃO AMPLIFICADA ORIA DE HAMSTER CHINÊS

• Autor(a) principal: CRISTIANO, Cristiane Carlos
• Data de Publicação: 2007
• Outros Autores: MOREIRA, Bruna Manueli Teles, TOMBA, Ethiene Cristina, FERNANDEZ, Maria Aparecida, FIORINI, Adriana
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Digital Unicesumar
• Texto Completo: http://rdu.unicesumar.edu.br/handle/123456789/6524
• topic: DNA curvo; Região amplificada;; OriA

Origens de replicação e curvaturas intrínsecas do DNA são detectadas próximas ou colocalizadas, porém a função dessas estruturas na replicação ainda não foi determinada. Em células em cultura de fibroblasto de hamster Chinês induzidas à amplificação, o domínio do gene AMPD2 é amplificado em uma região poligênica. Nessa região é descrita uma origem preferencial para a iniciação da replicação, a oriGNAI3. Quando a eficiência de iniciação da oriGNAI3 é diminuída, outras origens potenciais são ativadas (oriA, oriB e oriC). Com o objetivo de identificar e discutir o possível envolvimento de sítios de DNA curvo com o processo de replicação que ocorre em segmentos amplificados, foi analisada, neste trabalho, a região amplificada de ~6.6 kb, onde se localiza a origem de replicação oriA. A seqüência foi analisada insilico através dos programas computacionais para análise da curvatura, Map15A e 3D15m1 e para desenho de primers para a PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) através do software Fast PCR. Foram observados dois picos de curvatura nas posições 300 e 5870 pb, com valores de ENDS ratio 1,13 e 1,12, respectivamente. A modelagem tridimensional da região de ~6,6 kb e de seqüências ao redor de cada pico foi obtida. O primeiro pico de curvatura está localizado na região da oriA. A análise in silico da PCR permite predizer as condições ótimas desta reação, a qual poderá ser realizada para o isolamento e posterior subclonagem destes fragmentos. Esta análise preliminar permitirá estabelecer uma relação entre estrutura e função nesta região de replicação gênica.