Perfil das comunidades de Archaea em sistemas anaeróbios de tratamento de efluentes domésticos utilizando a eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE)

• Autor(a) principal: Bettio, Guilherme Pianaro
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da Universidade Cruzeiro do Sul
• Texto Completo: https://repositorio.cruzeirodosul.edu.br/handle/123456789/2555
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOLOGIA GERAL; DGGE; PCR; Archaea; Tratamento anaeróbio; Biogás; Extração de DNA

No presente trabalho, foram coletadas amostras de lodo provenientes de duas estações de tratamento de efluentes domésticos da Sanepar, Curitiba – PR. Sendo uma proveniente de lagoa anaeróbia (LA) e outra proveniente de reator anaeróbio de leito fluidizado (RALF). Oito procedimentos foram empregados para a extração do DNA das comunidades presentes nas amostras coletadas, sendo que dois deles (procedimentos 1 e 2 de extração) foram eficientes na obtenção de um produto de qualidade. Após a obtenção de DNA de qualidade, tanto para amostra de RALF quanto para amostra de LA, foram realizadas as amplificações de fragmentos alvo que codificam a região do 16S rDNA de Archaea. As amplificações foram realizadas por PCR utilizando os iniciadores PRA46f e PREA1100r, seguidas de Nested PCR utilizando os iniciadores PARCH340f e PARCH519r. As condições de amplificação foram modificadas diversas vezes a fim de atingir uma maior qualidade e especificidade do produto final. Após a amplificação do fragmento de aproximadamente 180 pb pela Nested PCR, os mesmos foram purificados e submetidos a sequenciamento. Os fragmentos foram também submetidos à técnica de eletroforese em gel de gradiente desnaturante (DGGE) que gerou perfis das comunidades presentes em ambos os sistemas. Dessa forma, foi possível a comparação desses perfis e através da análise de componente principal (PCA), com base no método de Bray-Curtis, e assim verificar a diferença no perfil obtido para as amostras de RALF e de LA, que indica a diferença na composição das comunidades presesntes nos dois sistemas. O grau de similaridade foi de 65% para as comunidades existentes nos diferentes ambientes.