Desenvolvimento e Padronização da Técnica da Reação de Amplificação Isotérmica mediada por Loop (LAMP) para Diagnóstico de Streptococcus agalactiae em Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Espinola Maciel, Valeria Belen
Data de Publicação: 2023
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UNILA
Texto Completo: https://dspace.unila.edu.br/handle/123456789/7508
Resumo: Trabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Ciências Biológicas – Ecologia e Biodiversidade. Orientação: Prof. Dr. Kelvinson Fernandes Viana
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spelling Desenvolvimento e Padronização da Técnica da Reação de Amplificação Isotérmica mediada por Loop (LAMP) para Diagnóstico de Streptococcus agalactiae em Tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus)LAMPStreptococcus agalactiaepatógenostilápiasTrabalho de Conclusão de Curso apresentado ao Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e Natureza da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Bacharel em Ciências Biológicas – Ecologia e Biodiversidade. Orientação: Prof. Dr. Kelvinson Fernandes VianaA tilápia do Nilo (Oreochromis niloticus) é amplamente cultivada em todo o mundo, sendo um dos peixes de maior produção e grande importância econômica para muitos países, incluindo o Brasil. Portanto, perdas na produção causam impactos significativos na indústria aquícola, principalmente, em caso de surtos epizoóticos. Infelizmente, as tilápias são vulneráveis a várias infecções bacterianas, como a estreptococose causada pelo patógeno Streptococcus agalactiae. Um desafio enfrentado é a falta de um método de diagnóstico rápido para fornecer tratamentos adequados aos peixes. Consequentemente, é crucial desenvolver um método rápido, específico e acessível para detectar esse patógeno. Atualmente, a técnica de Amplificação Isotérmica Mediada por loop (LAMP) tem sido amplamente utilizada em diversos campos da biologia, demonstrando ser rápida, simples, sensível e específica na detecção de vários patógenos, amplificando o DNA alvo a uma temperatura constante e produzindo múltiplas cópias. O objetivo deste estudo é desenvolver o ensaio LAMP como um método simples e rápido para detectar a bactéria Streptococcus agalactiae, que infecta as tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus), assim como também, padronizar a técnica LAMP qualitativa para a identificação de S. agalactiae e testar a especificidade dos primers utilizando outras cepas bacterianas, comumente presentes em tilápias e no ambiente em que vivem. Para isso, as cepas bacterianas foram cultivadas a partir de amostras criopreservadas, o DNA foi extraído e foram realizados testes de padronização em três temperaturas diferentes (55 °C, 60 °C e 65 °C), utilizando três pares de primers para aumentar a amplificação. Já para o teste de especificidade dos primers, as cinco cepas bacterianas foram submetidas às mesmas condições de reação utilizadas na padronização, mas com uma temperatura de 60 °C, e a detecção visual foi feita utilizando o corante SYBR Green I. Os resultados demonstraram que foi possível padronizar a reação de forma simples, com amplificação do produto a 60 °C. Essa temperatura foi utilizada no teste de especificidade dos primers, no qual a técnica LAMP mostrou amplificação específica para S. agalactiae em comparação com as outras bactérias, sem ocorrência de amplificação cruzada. Dessa forma, a técnica LAMP se mostrou rápida e simples, sendo ideal para a detecção de patógenos como S. agalactiae. Recomenda-se a realização de estudos futuros utilizando amostras de tecido fresco de tilápias do Nilo, a fim de avaliar a sensibilidade do teste e explorar outros parâmetros relevantes.2023info:eu-repo/semantics/bachelorThesisinfo:eu-repo/semantics/publishedVersionapplication/pdfhttps://dspace.unila.edu.br/handle/123456789/7508porinfo:eu-repo/semantics/openAccessEspinola Maciel, Valeria Belenreponame:Repositório Institucional da UNILAinstname:Universidade Federal da Integração Latino-Americana (UNILA)instacron:UNILA2024-05-11T12:36:47Zoai:dspace.unila.edu.br:123456789/7508Repositório InstitucionalPUBhttp://dspace.unila.edu.br/oai/requestopendoar:36362024-05-11T12:36:47Repositório Institucional da UNILA - Universidade Federal da Integração Latino-Americana (UNILA)false
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