Caracterização funcional de microRNAs em carcinoma pancreático

• Autor(a) principal: Felix, Tainara Francini [UNESP]
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/181211
• topic: Pancreas; Adenocarcino pancreático; microRNAs

Introdução: O carcinoma de pâncreas apresenta altas taxas de mortalidade, geralmente associadas ao diagnóstico tardio da doença. MicroRNAs (miRNAs) são importantes reguladores da expressão gênica e têm sido apontados como biomarcadores com valor diagnóstico, prognóstico no câncer. Objetivos: (1) identificar níveis de expressão de miRNAs em tumores de pacientes com câncer de pâncreas; (2) identificar, “in silico”, genes-alvo dos miRNAs e vias moleculares envolvendo miRNAs e genes-alvo correspondentes; (3) realizar estudos funcionais “in vitro” para demonstrar experimentalmente os efeitos da desregulação de miRNAs nos potenciais de migração e invasão celulares. Materiais e Métodos: Foram incluídas 19 amostras de adenocarcinoma ductal pancreático (PDAC) e 6 de adenocarcinoma de ampola de Vater (AMP), pareadas com tecido histologicamente normal. Além disso, 3 linhagens celulares de carcinoma pancreático (BxPC-3, Capan-2 e Panc-1) foram analisadas quanto ao seu perfil global de expressão de miRNAs. Em todas as amostras, o perfil de expressão de miRNAs foi determinado utilizando a plataforma GeneChip® 4.0 miRNAarrays. A validação “in silico” utilizou dados de transcriptoma do The CancerGenome Atlas (TCGA) (N=178 carcinomas pancreáticos e 4 tecidos histologicamente normais dos mesmos pacientes). A linhagem Panc-1 foi testada em ensaios de migração e invasão antes e depois da expressão dos miRNAs miR-148a-3p e miR-216b-5p por meio de moléculas miméticas. Análises computacionais utilizaram algoritmos de bioinformática para identificar genes-alvo regulados por miRNAs (miRNA Data Integration Portal, mirDIP) e vias moleculares envolvendo genes e miRNAs (ToppGenes). Adicionalmente, os genes-alvo dos miRNAs foram testados quanto ao seu valor prognóstico (SurvExpress). Resultados: Foram identificados diferentes perfis de expressão global de miRNAs entre tumores e controles normais e entre os subtipos de adenocarcinoma pancreático (PDAC e AMP). Os miRNAs que apresentaram o maior nível de desregulação, com expressão diminuída entre tecido tumoral e normal foram: miR-148a-3p, miR-216b-5p e miR-217. A análise de predição de genes-alvo e vias moleculares identificou um enriquecimento para vias do sistema imune inato e adaptativo em PDAC. A validação “in silico” (dados do TCGA) revelou um conjunto de genes-alvo (PTPRC/KLRK1/SELL/KLRF1/HLA-DOA/RASGRP3/BTLA/BTNL9) com expressão aumentada em PDAC e correlacionados com a pior sobrevida dos pacientes. Os ensaios funcionais demostraram que o aumento da expressão dos miRNAs miR-148a-3p e miR-216b-5p diminuiu o potencial de migração celular da linhagem Panc-1. Conclusões: Os resultados desse estudo identificaram que perfis distintos de expressão de miRNAs, nos subtipos de carcinoma pancreático PDAC e AMP, modulam diferentes vias moleculares associadas à oncogênese. Os resultados sugerem que a modulação da expressão de miRNAs pode ter um impacto no desenvolvimento tumoral. Tais achados podem contribuir para a melhoria das estratégias de diagnóstico e tratamento de pacientes com carcinoma pancreático.