Identificação de espermatozóides portadores do cromossomo X em búfalos (Bubalus bubalis)

• Autor(a) principal: Mota, Adriano Vitti [UNESP]
• Data de Publicação: 2005
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/98248
• topic: Bufalo - Reprodução; Buffaloes

A fração de espermatozóides X ou Y foi separada por centrifugação em nove diferentes gradientes de Percoll com densidades que variavam entre 0,9 a 1,06g/mL que foi obtida através de solução “stock” de Percoll composta de 11 partes de Percoll em 1 partes de solução contendo KCl (1M), NaH2PO4 (0,1M), NaCl (1,5M) e HEPES sódico (23,8g/mL). Para preparação dos nove diferentes gradientes de Percoll adicionou-se à solução stock a Solução A (do diluente glicina-gema) em diferentes partes. O sêmen foi centrifugado em Percoll 80% em 200xg por 10 minutos, o “pellet” foi depositado sobre os nove gradientes de Percoll, centrifugado a 100xg por 30 minutos. O novo “pellet” formado foi lavado em TES, mesmo diluente em que foi suspendido para congelação, juntamente com os espermatozóides suspendidos foi congelado sêmen fresco apenas diluído em meio TES para controle. Os espermatozóides descongelados do controle e do sêmen tratado foram corados com quinacrina mostarda e quantificadas 200 células para obtenção do percentual de espermatozóides portadores do Corpúsculo-F, observando uma diferença média 17,5% entre o grupo tratado e o controle. A centrifugação apresentou, através de seleção, uma melhora de motilidade, vigor e cauda fortemente dobrada significativa para as partidas que obtiveram boa congelação, quando comparados o grupo tratado ao controle, sem alteração significativa de defeitos de cauda dobrada, peça intermediária e integridade de membrana e com aumento significativos de alterações de acrossôma. Pode-se concluir que a técnica desenvolvida mostrou-se viável para separação de espermatozóides portadores de X dos portadores de Y a serem utilizados em técnicas de IA e principalmente em FIV, eliminando a necessidade de capacitação empregada na técnica.