Validação da variante c.3140A>G e de suas potenciais proteínas alvo relacionadas a via PIK3CA/AKT/mTOR em neoplasias mamárias de cadelas

• Autor(a) principal: Perossi, Isabela Fernanda Spinelli
• Data de Publicação: 2022
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/217609
• topic: Neoplasia mamária; Via pi3k/akt/mtor; Expressão proteica; Expressão gênica; Prognóstico; Metástase; Breast cancer; PI3K/AKT/mTOR pathway; Protein expression; Gene expression; Prognosis; Metastasis

O câncer de mama (CM) é um relevante problema de saúde pública, pois representa a segunda principal causa de morte relacionada ao câncer em mulheres em todo o mundo. Os cães são utilizados como modelo para estudos desses tumores, pois além da grande ocorrência, possuem semelhanças biológicas e fisiopatológicas. A via PIK3CA/AKT/mTOR está fortemente desregulada no câncer de mama e desempenha papel central na homeostase celular. A literatura recente retrata que todas as mutações somáticas identificadas a partir do gene PIK3CA alteraram as sequências de aminoácidos, dentre eles a variante c.3140A> G. Esse gene participa da regulação de uma ampla gama de atividades celulares relevantes englobando várias proteínas importantes. Na medicina veterinária o estudo desta via é incipiente. O objetivo deste trabalho foi analisar a variante c.3140A>G do gene PI3KCA e a expressão das proteínas alvo PIK3CA, PTEN, HIF, VHL, ZEB1, ZEB 2, Caspase-3 e PARP1 como marcadores prognósticos em um estudo prospectivo, verificando a expressão gênica dessa variante e, em um estudo retrospectivo, avaliando a expressão proteica e gênica de alvos moleculares à jusante da via correlacionando com o prognóstico nas cadelas. No estudo retrospectivo, o DNA de 24 fragmentos de tumores mamários caninos e 20 fragmentos normais de mama de cadelas foi extraído e a mutação verificada usando TaqMan® Mutation Detection Assay. A imunohistoquímica foi realizada com o kit Reveal HRP Conjugate e sua análise pelo método Histoscore. Duas pacientes (8,3%) apresentaram a mutação c.3140A> G, sendo que uma paciente apresentou metástase pulmonar e morreu em 30 dias após o diagnóstico e a outra paciente permanece viva. Os dados de imunohistoquímica revelaram que a expressão das proteínas PIK3CA, HIF, ZEB2 e PARP1 foi maior na paciente que veio a óbito em comparação com a que permanece viva (p<0,05). No estudo prospectivo, para a análise proteica as amostras foram provenientes de 58 cadelas com neoplasia mamária, previamente identificadas por análise histopatológica. A imunohistoquímica foi realizada com o kit Reveal HRP Conjugate e sua análise pelo método Histoscore. Para a análise genica as amostras são provenientes de 13 pacientes caninas acometidas por neoplasia mamária primária, o DNA foi extraído segundo o método de Sambrook & Russel e realizada a análise para expressão quantitativa utilizando o sistema Step One Plus. Através da imunohistoquimica foi observado que a positividade de PIK3CA foi significativamente associada a linfonodo regional8 acometido, à metástase a distância, às pacientes com fenótipos HER2+, Triplo Negativo e Luminal B e também à menor sobrevida. Por meio da expressão gênica observamos, entre as pacientes vivas e com óbito, expressão gênica mais elevada de ZEB2 e PARP1 comparado aqueles sem metástase, o que não foi verdadeiro para as expressões de PIK3CA e HIF1 α. Em conclusão, os dados observados neste trabalho são promissores no estudo de novos marcadores moleculares de prognostico adequados para o desenvolvimento de novas terapias, ainda assim mais pesquisas destinadas a esclarecer e validar as relações entre a via PI3K/AKT/mTOR.