Avaliação da teneurina-2 (Ten-2) nos astrócitos do córtex cerebral de ratos adultos após lesão mecânica. Estudo imuno-histoquímico e de expressão gênica

• Autor(a) principal: Tessarin, Gestter Willian Lattari [UNESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/138914
• topic: Astrócitos; Córtex cerebral; Lesão mecânica; Ratos; Teneurina; Astrocytes; Cerebral Cortex; Mechanical lesion; Rats; Teneurins

As teneurinas (TENs) pertencem a uma família de proteínas transmembrana do tipo II constituída por quatro membros homólogos, estruturalmente conservados entre as espécies. Essas proteínas estão presentes no SNC, principalmente durante a neurogênese, colaborando na estabilização dos circuitos neurais. Estudos neuroanatômicos mostraram que as TENs apresentam distribuição similar em peixes, aves e roedores durante o desenvolvimento e maturação do SNC, permanecendo em algumas regiões em animais adultos. A participação das TENs durante reparação tecidual tem sido pobremente explorada; entretanto a presença neurestina (uma proteína homóloga a Ten-2) foi notada em neurônios do bulbo olfatório de ratos adultos, após indução de lesão química na mucosa olfatória. O propósito do presente estudo foi verificar possíveis alterações na Ten-2 após indução de lesão mecânica no córtex cerebral de ratos adultos empregando técnicas de imuno-histoquímica (IHQ) e reação em cadeia da polimerase (PCR convencional). Para isso, ratos machos adultos (Rattus norvegicus, n=32) foram divididos em grupo controle (n=4, IHQ; n=4, PCR), grupo lesão 12 horas pós-operatório (n=4, IHQ; n=4, PCR), grupo lesão 24 horas (n=4, IHQ; n=4, PCR) e grupo lesão 48 horas (n=4, IHQ; n=4, PCR). A lesão mecânica foi realizada usando agulha hipodérmica de metal (0,8mm de diâmetro) acoplada ao aparelho estereotáxico (coordenadas AP: +10,21 mm; DV: -2,5 mm e ML: +1,5 mm). Os animais do grupo controle não foram submetidos aos processos cirúrgicos. Para as análises imuno-histoquímicas, os animais foram submetidos à perfusão transcardíaca usando paraformaldeído tamponado a 4% e os cortes histológicos foram obtidos utilizando micrótomo de congelação. Os cortes histológicos foram submetidos às técnicas de imunofluorescência ou imunoperoxidase indiretas usando anticorpos para identificar proteína ácida fibrilar glial (GFAP) e Ten-2, seguido por análises em microscopias de campo claro ou confocal. Para análises de expressão gênica, os animais foram sacrificados, o córtex cerebral foi imediatamente coletado para extração e purificação do RNA total. O RNA foi usado para amplificar a Ten-2 e o neurofilamento de cadeia leve (Nefl, para normalização) através de PCR convencional e as análises semi-quantitativas foram realizadas pela mensuração da densidade óptica das bandas em gel de agarose. Os principais resultados indicaram um aumento significante em astrócitos imunorreativos para a Ten-2 em todos os grupos lesões, especialmente no grupo lesão 48 horas (p<0,001), comparado com o grupo controle. As análises de expressão gênica mostraram aumento significante para a expressão de Ten-2, principalmente no grupo lesão 48 horas (p<0,01), comparado com os demais grupos com lesão. O presente estudo demonstrou pela primeira vez a presença de Ten-2 em astrócitos, após indução de lesão mecânica no córtex cerebral de ratos adultos. Estudos futuros são necessários para elucidar se a Ten-2 presente nos astrócitos exerce um papel facilitatório ou inibitório no reparo tecidual do SNC após lesões mecânicas.