Pesquisa de Leishmania spp. em primatas de cativeiro de cinco regiões brasileiras por diferentes técnicas de diagnóstico

• Autor(a) principal: Guiraldi, Lívia Maísa [UNESP]
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/194313
• topic: Diagnóstico; Leishmaniose; Primata não-humano; Saúde única; Zoológico; Diagnosis; Leishmaniasis; Non-human primates; One health

Leishmanioses são zoonoses ocasionadas por protozoários da Família Trypanosomatidae e do gênero Leishmania, tendo como vetor diferentes espécies de flebotomíneos pertencentes ao gênero Lutzomyia nas Américas e Phlebotomus no Velho Mundo. Além dos humanos, animais domésticos e silvestres de vida livre e de cativeiro, podem naturalmente se infectar pelo protozoário, podendo atuar como reservatórios, incluindo os primatas não humanos (PNH). Neste trabalho o objetivo foi a pesquisa de Leishmania spp. em 189 PNH cativos, provenientes de quatro zoológicos e um centro de conservação das cinco regiões brasileiras, por meio do diagnóstico direto em esfregaço por extensão sanguínea; Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI), para pesquisa de anticorpos contra o parasito; Reação em Cadeia da Polimerase convencional (cPCR) para amplificação do DNA do protozoário nas amostras de sangue e células conjuntivais; caracterização molecular com o uso de alvos gênicos direcionado ao citocromo de Leishmania spp. com posterior sequenciamento genético para identificação da espécie envolvida na infecção e a discriminação de espécies de Leishmania por análises de dissociação de DNA em alta resolução (HRM). Foram observadas formas amastigotas por diagnóstico direto de quatro primatas. Oito PNH foram reagentes à técnica sorológica de RIFI. A detecção molecular nas amostras de sangue mostrou positividade em 22 PNH e a detecção nas amostras de suabes conjuntivais também foi possível em 22 PNH (sendo cinco deles positivos tanto no sangue como no suabe), em todos os locais amostrados, exceto da região Sul. Para pesquisa de família Trypanosomatidae, recomenda-se o uso de primers direcionados a região V7 e V8 do rRNA que amplificou o DNA em 16 PNH. O DNA de L. infantum foi amplificado em seis animais, bem como a amplificação do DNA de L. braziliensis em nove PNH. Para caracterização molecular, recomenda-se o uso de primers direcionados às sequências do gene de citocromo da subunidade II da oxidase (CoxII) de Leishmania spp., permitindo a identificção de L. infantum em 13 delas. Este é o primeiro trabalho que obteve êxito na utilização da técnica de HRM na discriminação de espécies de Leishmania em amostras de PNH, revelando 11 animais com L. infantum, e cinco positivos para L. braziliensis. Considerando os resultados de todas as técnicas propostas (parasitológico; sorológico e molecular (cPCR de sangue e células conjuntivais), as análises pontuais dos casos positivos revelaram que na região Norte do país foi a que apresentou maior porcentagem de PNH positivos para Leishmania spp. (60%), seguida das regiões Sudeste (35,41%), Centro-Oeste (30,5%) e Nordeste (29,62%). A região Sul não apresentou nenhum animal positivo. Os resultados desse estudo evidenciam a infecção natural por parasitos Leishmania spp. em animais silvestres e apesar do papel dos PNH na epidemiologia das leishmanioses deva ser melhor esclarecido, os resultados sugerem a participação dos PNH na manutenção do ciclo de transmissão em áreas onde a doença é endêmica. Estes animais devem ser levados em consideração para o estabelecimento de medidas de vigilância e controle da doença no contexto One Health visando a participação dos animais (domésticos e silvestres), do homem e do meio ambiente para o entendimento dos processos de saúde e doença contribuindo para o bem-estar comum.