Microdissecção e captura a laser na investigação do gene TP53 em tecidos incluídos em parafina

• Autor(a) principal: Ihlaseh, Shadia Muhammad [UNESP]
• Data de Publicação: 2007
• Outros Autores: Oliveira, Maria Luiza Cotrim Sartor de [UNESP], Silva, Glenda Nicioli da [UNESP], Franchi, Carla Adriene da Silva [UNESP], Camargo, João Lauro Viana de [UNESP]
• Tipo de documento: Artigo
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://dx.doi.org/10.1590/S1676-24442007000100012; http://hdl.handle.net/11449/13080
• topic: Microdissecção e captura a laser; Extração de DNA; Nested-PCR; Gene TP53; Gene ciclofilina; Blocos de parafina; Laser-capture microdissection; DNA extraction; nested-PCR; TP53 Gene; Ciclophilin gene; Paraffin-embedded tissues

INTRODUÇÃO: Microdissecção e captura a laser (MCL) é uma técnica de desenvolvimento recente que permite a coleta de células individuais ou pequeno conjunto de células para análise molecular. Atualmente, no Brasil, há raros microscópios para MCL, de modo que a divulgação dos procedimentos inerentes a essa técnica é oportuna para destacar seu amplo potencial para diagnóstico e investigação. OBJETIVO: Este trabalho descreve a padronização dos procedimentos de MCL e de extração de DNA de material fixado em formalina e incluído em parafina. MATERIAL E MÉTODOS: Foram estudados o éxon 8 do gene TP53 e o gene da ciclofilina em amostras de tecido normal e de neoplasias de fígado e rim provenientes de modelo de carcinogênese química induzida em rato. A extração do DNA foi comprovada por reação em cadeia da polimerase (nested-PCR). RESULTADOS: Foram padronizados os procedimentos de preparo dos cortes histológicos, de microdissecção e captura a laser e de obtenção de seqüências gênicas pela reação de nested-PCR para tecidos incluídos em parafina. Obtivemos amplificação de 48,3% das amostras para o éxon 8 do gene TP53 e 51,7% para o gene da ciclofilina. Considerando pelo menos um dos dois segmentos gênicos, foram amplificadas 79,3% das amostras. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: A extração de DNA de tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina e a técnica de nested-PCR foram adequadamente padronizadas para produtos gênicos de interesse, obtidos de material coletado por MCL. Esses procedimentos podem ser úteis para a obtenção de seqüências de DNA de arquivos para análise molecular.