Avaliação dos fatores de virulência, atividade antimicrobiana e viabilidade celular de bactéria cariogênica na presença do Terpinen-4-ol: estudo in vitro

• Autor(a) principal: Bordini, Ester Alves Ferreira [UNESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/138899
• topic: Fatores de virulência; Cárie dentária; Medicamentos Fitoterápicos; Virulence factors; Dental caries; Phytotherapeutic frugs

A utilização de óleos essenciais tem sido amplamente difundida no tratamento de doenças infecciosas que acometem a cavidade oral por serem eficazes contra patógenos presentes em biofilme. Dentre estes produtos de origem natural, destaca-se o Terpinen-4-ol um biocida membrana-ativo, com amplo espectro de ação contra bactérias gram-positivas, gram-negativas e bactérias multi-resistentes. Neste estudo, investigou-se o efeito antimicrobiano do Terpinen-4-ol sobre culturas planctônicas e biofilmes de Streptococcus mutans (S. mutans) e a expressão gênica de glucano de ligação de proteína A (gbpA) envolvido na adesão em biofilme. A atividade antimicrobiana do Terpinen-4-ol (0.059 % a 0.95 %) foi avaliada pelo teste de microdiluição em caldo com a determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Bactericida Mínima (CBM) para o microrganismo na forma planctônica. O biofilme formado em placa de cultura celular foi tratado com diferentes concentrações de Terpinen-4-ol e o metabolismo celular do biofilme resultante foi avaliado por meio de ensaio de hidróxido de 2,3-bis (2-metoxi-4-nitro-5-sulfo-fenil) -2H-tetrazólio-5-caboxanilide (XTT). A análise do biofilme formado sobre blocos de esmalte e dentina tratados com Terpinen-4-ol (0.24 % e 0.95 %) e Clorexidina (CHX 0.12 %) durante 60 segundos foi realizada por meio de ensaio de XTT e razão espectral (verde/vermelho) das imagens obtidas por Microscopia Confocal de Varredura a Laser (MCVL). A expressão gênica de gbpA foi investigada por RT-PCR quantitativo após exposição de S. mutans ao Terpinen-4-ol e CHX por 15 e 30 minutos. Os dados obtidos apresentaram distribuição normal e, portanto, foram utilizados os testes paramétricos de ANOVA One-way e de Tukey. Todos os testes estatísticos foram considerados em nível de significância de 5% (p<0.05). Terpinen-4-ol demonstrou atividade antimicrobiana a partir da concentração de 0.24 % tanto para o microrganismo em cultura planctônica quanto para biofilme formado em placa de cultura celular e esmalte, com redução microbiana próxima a 100 %. Não houve diferença estatisticamente significante entre Terpinen-4-ol e CHX. Para biofilme em dentina, a concentração de Terpinen-4-ol 0.95 % apresentou atividade antimicrobiana tanto pela análise por XTT quanto por MCVL. Houve redução na expressão de gbpA quando em contato com Terpinen-4-ol durante 15 minutos, no entanto a superexpressão gênica ocorreu a partir dos 30 minutos de exposição. CHX levou a superexpressão do gene gbpA em todos os tempos testados. Estes achados demonstram que Terpinen-4-ol apresenta importante atividade antimicrobiana e capacidade de modulação da expressão de genes envolvidos na formação de biofilme cariogênico, podendo ser utilizado no tratamento de doenças infecciosas bucais.