Avaliação de estruturas bacterianas envolvidas no estabelecimento do padrão de aderência híbrido localizado/difuso em amostras de Escherichia coli enteropatogênica atípica pertencentes ao sorotipo O2:H16

• Autor(a) principal: Vieira, Melissa Arruda
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNESP
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11449/192253
• topic: aEPEC; Escherichia coli enteropatogênica atípica; Sistema de secreção do tipo III; Adesão; Adhesion; Type III secretion system (T3SS)

O principal mecanismo de virulência de Escherichia coli enteropatogênica (EPEC) é a capacidade de causar uma lesão histopatológica na mucosa intestinal denominada attaching and effacing (AE), caracterizada pela aderência íntima das bactérias, destruição das microvilosidades e formação de estruturas semelhantes a pedestais, ricos em F-actina, nos enterócitos infectados. Genes do locus of enterocyte effacement (região LEE) codificam todas as proteínas necessárias para a formação da lesão AE. As EPEC são divididas em típicas (tEPEC) e atípicas (aEPEC), com base na presença do EPEC adherence factor plasmid no primeiro grupo. A partir de um conjunto de sete amostras de aEPEC pertencentes ao sorotipo O2:H16, obtidos de surtos e casos esporádicos de diarreia, mostramos que cinco deles produziram uma adesão híbrida localizada/difusa (AL/AD) em células HeLa. Neste estudo, uma amostra de aEPEC deste sorotipo (282/14), que produziu o padrão AL/AD, foi selecionada para investigar as estruturas bacterianas envolvidas em seu fenótipo adesivo. Para este propósito, a amostra de aEPEC 282/14 foi mutagenizada usando o kit EZ::TN <R6Kyori/KAN-2> Tnp transposome kit, gerando uma biblioteca de inserções Tn5. Esses mutantes de inserção Tn5 foram testados quanto a perda ou redução da capacidade aderente, em ensaios realizados em 6 h de incubação com células HeLa. Dentre 320 clones pesquisados, nove foram considerados deficientes em sua capacidade de interagir com células epiteliais e quatro deles apresentaram a inserção Tn5 em genes da região LEE, como: tir, escV e grlR. Com o intuito de confirmar o papel da interação Intimina-Tir no estabelecimento deste fenótipo híbrido, foram construídos mutantes isogênicos nos genes eae e escN, que codificam a adesina intimina e a ATPase necessária para a montagem do SST3 (sistema de secreção tipo III), respectivamente. Os mutantes isogênicos gerados na intimina (eae) e no translocon do T3SS (escN) mostraram uma diminuição no número de bactérias associadas a células (P<0,05), em comparação com a amostra selvagem. A complementação in trans restaurou a capacidade dos mutantes eae e escN em aderirem eficientemente às células HeLa. A busca de polimorfismos em domínios funcionais do SST3 mostrou não interferir na adesão da amostra escolhida para este estudo. Em conclusão, demonstrou-se que o estabelecimento do fenótipo híbrido de adesão AL/AD na amostra de aEPEC 282/14 é dependente exclusivamente da interação Intimina-Tir.